ロタウイルスを基盤とした粘膜免疫誘導ワクチンベクターの開発

基于轮状病毒的粘膜免疫诱导疫苗载体的开发

基本信息

批准号：
21K07057
负责人：
河本聡志
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

重要な下痢症ウイルスの一つであるロタウイルスは小腸絨毛を標的器官とすることから、ロタウイルスゲノムに他の病原体の中和抗原をコードする遺伝子を組み込めば、ロタウイルスのみならず他の病原体に対する免疫をも誘導できる粘膜免疫誘導ワクチンベクターとして活用できる可能性がある。一方で、野生型ロタウイルスは下痢病原性を有することからワクチンベクターのバックボーンには弱毒化させたロタウイルスが適していると考えられる。そこで今年度は、ロタウイルスの非構造蛋白質NSP6を発現欠損させることで下痢病原性を弱毒化できるかどうかを検討した。ロタウイルスがコードする非構造蛋白質NSP6のin vivoでの役割を明らかにするため、リバースジェネティクスでNSP6発現欠損組換えロタウイルスを作成し、乳のみBALB/cマウスでの増殖能と下痢病原性を検討した。NSP6欠損ウイルスは増殖に伴って下痢を誘導したものの、野生型に比べて発症期間は短くなり、重症度も軽くなった。また、腸管でのウイルス量は野生型に比べて減少した。加えて、腸管のHE染色と免疫組織化学染色から、小腸病変部の回復も野生型に比べて早いことが示された。これらの結果から、NSP6はin vivoにおけるロタウイルスの増殖や病原性発現に重要であり、NSP6を発現欠損させたロタウイルスは弱毒化することからワクチンベクターのバックボーンに適していることが示された。

轮状病毒是重要的腹泻病毒之一，它靶向小肠绒毛，因此，如果编码编码其他病原体的中和抗原的基因被掺入了rotavirus基因组中，则可以用作粘膜免疫疫苗的疫苗载体，从而诱导免疫，也不只能诱导rotaviruses，又对其他派路毒素也诱导了免疫。另一方面，由于野生型轮状病毒是腹泻病原体的，因此减毒的轮状病毒被认为适用于疫苗载体的骨架。因此，今年我们研究了轮状病毒非结构蛋白NSP6的缺乏表达是否可以减弱腹泻的致病性。为了阐明轮状病毒编码的非结构蛋白NSP6的体内作用，我们创建了一个重组轮状病毒，该轮状病毒通过反向遗传学缺乏NSP6表达，并检查了仅牛奶BALB/c小鼠的增殖潜力和腹泻的致病性。尽管NSP6缺陷型病毒随着其生长而诱导的腹泻，但与野生型相比，发作周期较短，严重程度降低。另外，与野生型相比，肠道中的病毒负荷量减少。此外，他对肠道的染色和免疫组织化学染色表明，小肠道病变的恢复速度快于野生型。这些结果表明，NSP6对于体内轮状病毒的生长和致病表达很重要，并且缺乏NSP6表达的轮状病毒被减弱，使其适合于疫苗载体的支柱。