機能未同定転写調節因子の網羅的解析によるA群レンサ球菌毒素蛋白質発現機構の解明

综合分析功能尚未明确的转录调控因子，阐明A族链球菌毒素蛋白的表达机制

• 批准号: 21K07007
• 负责人: 長谷川 忠男
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07007/
• 关键词: A群レンサ球菌; 発現調節因子; 酸化ストレス; 遺伝子導入; 毒素蛋白質; 発現制御; 蛋白質分解酵素; DNA分解酵素; 転写調節因子; 病原性

A群レンサ球菌は、1990年前後より再興感染症としての劇症型感染症の起因菌（人喰いバクテリア）となることが報告された。病原性発揮には毒素蛋白質の質的、量的変化が重要な役割を果たしているが、発現制御については未知の部分が多い。今回の研究ではゲノム情報から数多く推定される機能未知の転写調節を司ると考えられる因子の機能を明らかにすることにより、未知の発現制御の解明に取り組んでいる。1.転写調節遺伝子ノックアウト株の樹立ー劇症型感染症患者由来株である10-85のゲノム情報から機能未知の転写調節を司ると考えられる因子の網羅的なノックアウト株の樹立を試み、昨年度約40種類、今年度10種類のノックアウト株を樹立した。2.各種ストレスに対する解析ー昨年度DNA活性の減弱を報告した2種の転写調節因子ノックアウト株において、相補株、10-85以外の劇症型感染症由来1529株におけるノックアウト株も作成した。これらに、pHストレス、温度ストレス、酸化ストレス（過酸化酸素使用）などの各種ストレスを与え、増殖に及ぼす影響を検討した。その結果この2種は酸化ストレス応答にも関与していることが判明した。3.酸化ストレス実験ー上記2種以外のノックアウト株に対して酸化ストレス実験を行い、新たに2種のノックアウト株も酸化ストレス応答減弱を認めた。一つはPspCドメイン保有の蛋白質であり、もう一方はredoxを感知すると推定される発現制御因子であった。10-85以外の1529株においてもノックアウト株も樹立し、相補株の作成を試みたが、1529株由来PspCドメイン保有の蛋白質ノックアウト株ではいかなるプラスミドの導入もできなかった。10-85株と1529株は遺伝子導入に必要な遺伝子の違いがすでにゲノムから判明していたが、この蛋白質は異なる機序の遺伝子導入メカニズムに関与していることが示唆された。

据报道，A组链球菌是由暴发性感染引起的细菌（人类食人类细菌），因为自1990年左右以来是振兴的感染性疾病。毒素蛋白的定性和定量变化在发挥致命性方面起着重要作用，但在表达控制方面有许多未知的方面。在这项研究中，我们正在努力阐明被认为是由基因组信息推导的未知转录调控的因素的功能。 1。建立了转录调控的基因敲除菌株 - 我们试图建立全面的基因敲除因素，这些因素被认为是基于10-85的基因组信息来控制未知功能的转录调节，这是一种菌株，这是源自暴发性感染的患者，并确定了大约40个敲除条纹，并确定了大约40个基因敲除曲棍球和10个淘汰赛。 2。各种应力的分析 - 我们还创建了从互补菌株以外的突发感染菌株（10-85）衍生出的1529菌株的敲除菌株，在这两种转录调节器敲除型菌株中，报道了去年DNA活性减弱的。这些受到各种应力，例如pH应激，温度应激和氧化应激（使用过氧化氧），并检查了对增殖的影响。结果表明，这两个物种也参与对氧化应激的反应。 3。氧化应激实验 - 在上面两种类型以外的敲除菌株上进行了氧化应激实验，两种新的敲除菌株也显示氧化应激反应减少。一种是携带PSPC结构域的蛋白质，另一个是一种表达调节剂，被认为可以感觉氧化还原。敲除菌株还在1529菌株中建立了10-85以外的菌株，并试图创建互补菌株，但是在带有1529菌株的PSPC结构域的蛋白质敲除菌株中不可引入质粒。这些基因组已经揭示了菌株10-85和1529菌株之间基因转移所需的基因差异，但是有人提出该蛋白与不同机制的基因转移机制有关。