Functional analysis of malaria vaccine candidate antigen GAMA

疟疾疫苗候选抗原GAMA的功能分析

基本信息

批准号：
21K06990
负责人：
長岡ひかる
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University (2022)Ehime University (2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

マラリアワクチン開発は喫緊の課題でのため、これまでに我々はコムギ無細胞系を基盤に、新規赤血球期ワクチン候補分子の同定やヒトタンパク質ライブラリーによる赤血球レセプター探索を精力的に行ってきた。本研究では、近年見出した赤血球期ワクチン候補抗原であるGPI-anchored merozoite antigen (GAMA)の赤血球侵入における分子機能を明らかにするため、1)ヒト赤血球表面タンパク質ライブラリーによるGAMA相互作用分子の探索、 2)抗GAMA8モノクローナル抗体 (mAb)の作製、 3)mAbによるタンパク質相互作用ならびに原虫増殖に対する阻害活性の測定を行い、GAMAの分子機能に必須なタンパク質相互作用を明らかにする。2021年度は、コムギ無細胞系を用いてGSTタグ付きGAMA分子およびヒト赤血球タンパク質ライブラリーを合成し、アルファスクリーン法を用いて赤血球側相互作用分子を探索、複数個の赤血球側相互作用分子を発見した。さらにGAMA8抗原をマウスへ免疫し、抗血清の原虫抗原への反応性を確認した。 2022年度はウサギに免疫して得た抗体からモノクローナル抗体を複数個作出し、ウエスタンブロットとIFAを用いて抗血清の原虫抗原への反応性を確認、作成したモノクローナル抗体の原虫への増殖阻害活性を測定するため培養熱帯熱マラリア原虫に対し増殖阻害活性を測定した。最終年度は数段階の濃度を用いて増殖阻害活性を測定するとともに、作製したmAbがアルファスクリーン法で同定した赤血球レセプター分子とGAMA8の相互作用をどの程度阻害するのか、確立済みの Biacoreを用いた結合阻害活性測定系を用いて判定する。これにより、GAMA8-赤血球レセプターの相互作用を特異的に阻害できるmAbと、阻害しない抗GAMA8 mAbを各複数クローン樹立する。

由于开发疟疾疫苗是一个紧迫的问题，我们一直在积极致力于基于小麦无细胞系统识别新的红系阶段疫苗候选分子，并利用人类蛋白质库寻找红细胞受体。在本研究中，为了阐明最近发现的红系阶段疫苗候选抗原 GPI 锚定裂殖子抗原 (GAMA) 在红细胞侵袭中的分子功能，我们进行了 1) 使用人红细胞表面蛋白搜索 GAMA 相互作用分子文库；2) 抗 GAMA8 单克隆抗体 (mAb) 的制备，3) 测量 mAb 介导的蛋白质相互作用和对原生动物增殖的抑制活性，并阐明对 GAMA 分子功能至关重要的蛋白质相互作用。 2021年，我们利用小麦无细胞系统合成了带有GST标签的GAMA分子和人红细胞蛋白库，利用α筛选方法寻找与红细胞相互作用的分子，发现了多种与红细胞相互作用的分子细胞做到了。此外，我们用GAMA8抗原免疫小鼠并证实了抗血清对原生动物抗原的反应性。 2022财年，我们将从免疫兔子获得的抗体中制备多种单克隆抗体，使用Western印迹和IFA确认抗血清对原生动物抗原的反应性，并评估所制备的单克隆抗体对原生动物的生长抑制活性，以测定抗血清的活性。培养的恶性疟原虫疟原虫的生长抑制活性。最后一年，我们使用多个浓度测量了生长抑制活性，并使用已建立的Biacore方法确定了制备的mAb抑制GAMA8与α筛选方法鉴定的红细胞受体分子之间相互作用的程度。使用结合抑制活性测量系统。结果，建立了多个能够特异性抑制GAMA8-红细胞受体相互作用的单克隆抗体和不能特异性抑制GAMA8-红细胞受体相互作用的抗GAMA8单克隆抗体。