ラット腹膜中皮腫検体でのマイクロサテライトマーカーを用いるゲノム欠失解析

使用微卫星标记对大鼠腹膜间皮瘤标本进行基因组缺失分析

基本信息

批准号：
21K06968
负责人：
岡崎泰昌
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06968/
关键词：
中皮腫ラット動物モデルマイクロサテライト

项目摘要

ヒト悪性中皮腫で高頻度に見られる遺伝子異常は、CDKN2A/2B(Cyclin-dependent kinase inhibitor 2A/2B)の欠失、NF2(neurofibromatosis type 2, merlin)の欠失や遺伝子変異、BAP1(BRCA1-associated protein) 遺伝子変異が知られている。報告者が所属する研究室で行ったaCGH(array-based comparative genomic hybridization)によるラット悪性腹膜中皮腫でもCdkn2a/2bはゲノム欠失が高頻度に起き、Nf2もゲノム欠失が見られた。一方、Bap1の欠失は明らかに少なかった。ヒト悪性中皮腫ではBap1は遺伝子変異や小領域の欠失による機能喪失がしばしばみられ、良質な抗体が市販されていることもあり、FISH(fluorescent insitu hybridization)より免疫染色による蛋白分子の解析が施行されている。一方、CDKN2A/2B領域の欠失の有無は、免疫染色よりもFISHが推奨されている。そのため、Cdkn2a/2b領域が存在する5番染色体や、Nf2領域が存在する14番染色体を中心にPCR法によるF1 hybrid rat [Brown-Norway, Fischer344 (F344)] 由来悪性腹膜中皮腫のマイクロサテライト解析を行った。クロシドライト、クリソタイル、トレモライトといったアスベスト線維や多層カーボンナノチューブにより異なるゲノム欠失パターンが見られたが、中皮腫を自然発症しやすいF344由来母ゲノム欠失への偏りは明瞭ではなく、検体を追加する予定である。また、鉄化合物など中皮腫発がんを来す物質による中皮腫検体も追加検討する予定である。

人类恶性间皮瘤中常见的遗传异常包括 CDKN2A/2B（细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 2A/2B）缺失、NF2（2 型神经纤维瘤病，merlin）缺失和基因突变以及 BAP1（BRCA1）基因突变。是已知的。记者所属实验室进行的aCGH（基于芯片的比较基因组杂交）技术显示，大鼠恶性腹膜间皮瘤中经常出现Cdkn2a/2b基因组缺失，并且还观察到Nf2基因组缺失。另一方面，Bap1的缺失明显较少。在人类恶性间皮瘤中，Bap1 经常因基因突变或小区域缺失而丧失功能，并且由于高质量的抗体已市售，因此建议通过免疫染色而不是 FISH（荧光原位杂交）来分析蛋白质分子。被强制执行。另一方面，在确定 CDKN2A/2B 区域是否存在缺失时，建议使用 FISH 而非免疫染色。因此，使用含有Cdkn2a/2b区域的5号染色体和含有Nf2区域的14号染色体，通过PCR对来自F1杂交大鼠[Brown-Norway，Fischer344(F344)]的恶性腹膜间皮瘤的微卫星进行了分析。被执行。在石棉纤维（如青石棉、温石棉、透闪石和多壁碳纳米管）中观察到不同的基因组缺失模式，但 F344 衍生的母体基因组缺失（倾向于自发发展为间皮瘤）的偏向尚不清楚，因此我们计划添加更多样品。此外，我们计划另外检查含有导致间皮瘤致癌的物质（例如铁化合物）的间皮瘤标本。