ヒト疾患iPS細胞を利用した膵・腸管異常症の解明と再生医療への応用

利用人类疾病 iPS 细胞阐明胰腺和肠道异常及其在再生医学中的应用

• 批准号: 21K06970
• 负责人: 藤倉 純二
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06970/
• 关键词: 膵; Mitchell-Riley症候群; RFX6; レチノイン酸; RARE; 内胚葉; 腸管; PPARγ; PDX1; CDX2; NGN3; ヒトiPS細胞; 糖尿病; ミトコンドリア

本研究の中で我々が樹立したRFX6 +/eGFPヘテロノックイン ヒトiPS細胞を利用し、RFX6発現の上流制御機構について検討を行った。day4に胚体内胚葉を誘導、その後day10原始腸管誘導でのRFX6の発現が確認できるin vitro誘導系を用いて、胚性内胚葉から原始腸管レベルに至るまでに使用している3種の低分子化合物のいずれが決定的な要素であるかを検討し、、RFX6/GFP、前方前腸マーカーSOX2,後方前腸マーカーPDX1、中後腸マーカーCDX2にPDX１、CDX2発現上昇を引き起こし、SOX2発現に対しては抑制的な作用を。レチノイン酸は主にレチノイン酸受容体RARのアゴニストとして、また部分的にレチノイン酸X受容体RXRへのリガンドとして働き、RARとRXRはヘテロダイマーを形成して、DNA上のレチノイン酸応答エレメントRAREに特異的に結合することが知られている。前述のレチノイン酸のRFX6発現上昇への寄与については、RARアゴニストAm80を用いた実験で再現でき、RARを介した働きであることが確認できた。また、RFX6上流の候補RAREモチーフに対するRXR-RARヘテロダイマーの直接的な結合を、ゲルシフトアッセイを用いて確認した。RARA蛋白単独、RXRA蛋白単独では有意なシフトバンドを認めず、両蛋白を加えた時のみシフトバンドが確認され、非ビオチン化プローブにて競合阻害できた。これらから、候補RAREはRXR-RARヘテロダイマーに対して特異的に結合できることが確認でき、上流制御機構につき想定される機序の一端を解明した。

在本研究中，我们使用我们建立的RFX6 +/eGFP异敲入人iPS细胞来研究RFX6表达的上游调控机制。在第4天诱导定形内胚层，并在第10天在原始肠诱导过程中确认RFX6表达。使用体外诱导系统，我们检查了从胚胎内胚层到原始肠道水平使用的三种低分子量化合物中的哪一种是导致肠道标志物 SOX2 中 PDX1 和 CDX2 表达增加的决定因素。 、后前肠标记物 PDX1 和中后肠标记物 CDX2，并对 SOX2 表达具有抑制作用。视黄酸主要作为视黄酸受体 RAR 的激动剂，部分作为已知特异性结合的视黄酸的配体。上述视黄酸对 RFX6 表达增加的贡献可以在使用 RAR 激动剂 Am80 的实验中重现，证实该效应是由 RAR 介导的。此外，使用凝胶位移测定证实了 RXR-RAR 异二聚体与 RFX6 上游候选 RARE 基序的直接结合。单独的RARA蛋白或单独的RXRA蛋白没有观察到显着的移动带，并且仅当添加两种蛋白时才观察到移动带，表明使用非生物素化的探针可以实现竞争性抑制。这些结果证实了候选RARE可以特异性结合RXR-RAR异二聚体，并阐明了部分假设的上游调控机制。

项目成果

京都大学 糖尿病・内分泌・栄養内科

京都大学糖尿病·内分泌·营养学系

膵・膵島移植患者に対する内科医の関わり方 全盲の1型糖尿病患者に対する膵島移植

医生如何与胰腺和胰岛移植患者互动 盲人 1 型糖尿病患者的胰岛移植

• 发表时间: 2021
• 作者: 藤倉 純二(京都大学医学部附属病院 糖尿病・内分泌・栄養内科);穴澤 貴行;松山 陽子;伊藤 遼;中村 聡宏;境内 大和;波多野 悦朗;稲垣 暢也
• 通讯作者: 稲垣 暢也

日本人の肥満2型糖尿病患者に対する減量・代謝改善手術に関するコンセンサスステートメント

关于日本肥胖2型糖尿病患者减肥和代谢改善手术的共识声明

• 发表时间: 2021
• 作者: 佐々木 章(岩手医科大学 医学部外科学講座);内藤 剛;横手 幸太郎;稲垣 暢也;益崎 裕章;綿田 裕孝;小川 渉;下村 伊一郎;山内 敏正;石垣 泰;笠間 和典;野崎 剛弘;島袋 充生;藤倉 純二;その他
• 通讯作者: その他

新たなステージを迎えた糖尿病の移植医療 膵島移植の現状と課題

糖尿病移植医学迈入新阶段：胰岛移植的现状与挑战

• 发表时间: 2021
• 作者: 穴澤 貴行(京都大学医学部附属病院 肝胆膵・移植外科);波多野 悦朗;藤倉 純二;稲垣 暢也
• 通讯作者: 稲垣 暢也

ヒトiPS細胞を用いた内胚葉発生機構における新生児糖尿病原因遺伝子RFX6の機能解明

利用人 iPS 细胞阐明新生儿糖尿病致病基因 RFX6 在内胚层发育机制中的功能

• 发表时间: 2021
• 作者: 中村 聡宏(京都大学 大学院医学研究科糖尿病・内分泌・栄養内科学);藤倉 純二;伊藤 遼;稲垣 暢也
• 通讯作者: 稲垣 暢也