ペプチドミクスを用いた妊娠高血圧症候群早期診断マーカーの探索

利用肽组学寻找妊娠高血压综合征的早期诊断标志物

• 批准号: 21K06808
• 负责人: 福冨 俊之
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Kyorin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06808/
• 关键词: 妊娠高血圧症候群; プロテオミクス; ペプチドミクス; 診断マーカー; メタボロミクス; アミノ酸分析; 血清

妊娠高血圧症候群 (HDP) は、5～7%の妊婦に発症する高血圧を主体とした疾患である。その重症化は、母体・胎児双方に重大な合併症の原因となる。HDPの病因・病態については、今なお、不明な点が多く、妊娠の中断以外には根治的な治療法がなく対症療法が中心である。その為、迅速な医療介入が発症及び病態悪化の抑制に重要である。しかし、現在、HDP発症を予知する有効な方法は無い。従って、本研究では、HDPの早期診断につながる有用な発症予知マーカーの創出を目的とし、血漿を対象としたペプチドの網羅的な解析を実施する。予備的検討及び前年度までに、HDP発症患者および非発症患者の少数血清試料を用いて血中ペプチドを対象としたペプチドミクス解析を行った。HDP血清で増減するいくつかのペプチド部分配列を同定し、有意な増加を示した血液凝固第V因子の部分配列1:VEVEQKと配列2:GLGCGKを同定した。しかし、第V因子の他の部分配列では有意な増加を示さなかった。本年度は、試料採取および解析手法の最適化に注力した。試料採取においては、所属大学医学部付属病院臨床検査部の全面的な協力を得ることが可能となり、多くの検体採取を可能とするプラットフォームを構築した。それに伴い、HDP発症患者および非発症患者の血液試料を血清から血漿試料へと変更した。解析手法の最適化においては、1.血漿試料を用いた分析の最適化、2.定量分析に用いるアイソバリックタグおよびタグを用いない分析法の最適化を行い、従来の質量分析法の1つであるショットガン法（Data dependent acquisition）に加え、MRM技術を応用したDIA（Data independent acquisition）法を用いることにより多くのタンパク質を同定可能とした、3.血漿中の遊離アミノ酸分析およびメタボロミクス解析の条件検討を行った。

妊娠期高血压综合征（HDP）是一种以高血压为主要症状的疾病，5-7%的孕妇会发生这种疾病。当疾病恶化时，会给母亲和胎儿带来严重的并发症。 HDP的病因和病理生理学尚有许多不明之处，除中断妊娠外尚无根治性治疗方法，以对症治疗为主。因此，及时的医疗干预对于抑制病情的发作和恶化非常重要。然而，目前尚无有效的方法来预测HDP的发病。因此，在本研究中，我们将对血浆中的肽进行全面分析，旨在创建有用的预测标记物，从而实现 HDP 的早期诊断。在一项截至前一年的初步研究中，使用来自患有和不患有 HDP 的患者的少量血清样本对血液肽进行了肽组学分析。我们鉴定了 HDP 血清中增加或减少的几个肽子序列，并鉴定了凝血因子 V 的子序列 1：VEVEQK 和 2：GLGCGK 显示显着增加。然而，因子V的其他子序列没有表现出显着的增加。今年，我们重点优化样本采集和分析方法。在样本采集方面，我们得到了该校附属大学附属医院临床检验科的全力配合，搭建了一个平台，可以让我们采集大量的样本。因此，患有和不患有HDP的患者的血液样本从血清变为血浆样本。在优化分析方法时，我们进行了1.使用血浆样品的分析的优化，以及2.用于定量分析的同量异位标签的优化以及不使用标签的分析方法除了鸟枪法（数据依赖采集）之外，还有很多。可以使用应用MRM技术的DIA（数据独立采集）方法来鉴定蛋白质3.血浆中的游离氨基酸分析和代谢组学分析我们检查了条件。