長鎖ノンコーディングRNA Malat1による分枝形態形成の調節機構の解明

长非编码RNA Malat1阐明分支形态发生的调控机制

• 批准号: 21K06762
• 负责人: 林 徹
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06762/
• 关键词: Malat1; 顎下腺; RNA; 形態形成; 長鎖ノンコーディングRNA; 分枝形態形成

上皮が枝分かれを繰り返しながら伸長していく形づくりの様式は分枝形態形成と呼ばれ、そのモデル器官としては胎仔マウスの顎下腺が知られています。研究代表者はこれまでに胎仔マウス顎下腺を材料とし、遺伝子の発現レベルを調節するRNA（具体的には、タンパク質をコードしないノンコーディングRNA）が分枝形態形成に与える影響について調べてきました。本研究課題ではノンコーディングRNAのうち、200塩基以上の長鎖RNAを研究対象としています。Malat1は長鎖ノンコーディングRNAのひとつですが、分枝形態形成に関与することは知られていません。そのような中、予備実験にてMalat1が分枝形態形成を調節しうること見出しました。そこで当該年度はMalat1のin situ hybridization による局在解析を中心に進めました。方法としてはまず、Malat1の塩基配列をデータベースから取得し、プライマーを作成しました。つぎに作成したプライマーを用いてMalat1 転写産物の一部と相補的に結合するプローブを合成しました。一方、胎仔マウス顎下腺については急速凍結させて薄い切片を用意しました。プローブを切片に滴下し反応させると、Malat1が発現している細胞や組織が青く染色されます（in situ hybridization）。その結果、顎下腺の発生ステージによってMalat1の発現レベルや発現部位が大きく変動することが示唆されました。このことから分枝形態形成をはじめとする顎下腺の発生過程にMalat1が寄与している可能性が考えられます。

通过重复分支的上皮伸长形式被称为分支形态发生，而胎儿小鼠的颌下腺被称为这种模式的模型器官。迄今为止，主要研究人员利用胎儿小鼠颌下腺 Ta 研究了调节基因表达水平的 RNA（特别是不编码蛋白质的非编码 RNA）对分支形态发生的影响。本研究项目重点关注非编码RNA中200个碱基以上的长链RNA。 Malat1 是一种长链非编码 RNA，但尚不清楚它是否参与分支形态发生。在此背景下，初步实验表明 Malat1 可以调节分支形态发生。因此，今年我们重点开展了Malat1的原位杂交定位分析。首先，我们从数据库中获取了 Malat1 核苷酸序列并创建了引物。接下来，我们使用我们创建的引物来合成与 Malat1 转录物的一部分互补结合的探针。另一方面，快速冷冻胎鼠颌下腺并制备薄片。当探针滴到切片上并发生反应时，表达 Malat1 的细胞和组织会被染成蓝色（原位杂交）。结果表明，Malat1的表达水平和位置根据颌下腺的发育阶段而有很大差异。这表明 Malat1 可能有助于颌下腺的发育过程，包括分支形态发生。