MRSAに相乗的活性を示すクロプトシンとL-156,602の機序解析と有効性検討

对 MRSA 具有协同活性的止血素和 L-156,602 的机理分析和功效研究

• 批准号: 21K06488
• 负责人: 橋爪 秀樹
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Microbial Chemistry Research Foundation
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06488/
• 关键词: 作用機序解析; 相乗性; 黄色ブドウ球菌; 感染症薬; 動物実験; chloptosin; L-156,602; MRSA; 新規抗菌薬; メチシリン耐性黄色ブドウ球菌; クロプトシン; 相乗的抗菌活性

本研究では、Embleya sp. 放線菌の培養液から我々の見出した新規化合物クロプトシン類と、同時に生産される L-156,602 化合物間で見られる黄色ブドウ球菌に対する相乗的抗菌活性の機構解明を目的としている。この両化合物群は強い抗菌活性を示すが、関連物質も含めてその抗菌活性に関する作用機序が明らかになっていなかったため、まずは両化合物の単剤での抗菌活性に関する作用機序を明らかにし、ついで併用時の相乗性の作用機構についても解析を行う計画である。クロプトシン類およびL-156,602単剤での高分子合成阻害様式、殺菌曲線、顕微鏡観察を行い、膜作用性化合物であること、膜障害性に関して差があることを見出した。黄色ブドウ球菌に対する相乗効果について、種々濃度を振って経時的に生菌数を測定して殺菌曲線データを取得したところ、クロプトシンはMIC 付近では静菌的に作用し、MIC 以上では緩やかな殺菌性を示した一方、L-156,602 は短時間で強い殺菌力を示し、電顕観察によって細胞外観の変化が２剤で異なること、さらに併用時には両者の単剤のいずれとも異なる外観の変化が認められた。次に単剤並びに併用時の差異を明確にするために遺伝子発現変化について検討した。その結果、細胞壁合成、テイコ酸合成、嫌気呼吸、シデロフォア合成などに発現の増加が認められた。またマウスの黄色ブドウ球菌全身感染モデルにおける治療効果を評価するための予備検討を実施した。単剤での急性毒性試験より致死量が明らかとなり、治療試験における投与計画立案が可能になった。

这项研究旨在阐明我们在Embleya Sp培养物中发现的新型复合铬蛋白之间看到的针对金黄色葡萄球菌的协同抗菌活性的机制。放线菌和同时产生的L-156,602化合物。尽管两种化合物均表现出强大的抗菌活性，但尚未阐明抗菌活性的作用机制（包括相关物质），因此将首先阐明两种化合物的抗菌活性的作用机制，并且将分析组合使用时有关协同作用的作用机理。进行了与染色体和L-156,602抑制聚合物合成的模式，进行杀菌曲线和显微镜观察，发现它们是膜作用化合物，并且膜损伤存在差异。关于针对金黄色葡萄球菌的协同作用，我们通过摇动各种浓度以获得杀菌曲线数据来测量活细菌的数量。 Chloptocin在MIC附近作用于拟菌素，并在MIC上方显示出温和的杀菌特性，而L-156,602在短时间内表现出很强的杀菌特性，并且通过电子显微镜，细胞外观的变化在两种药物之间的变化差异，并且在组合中使用了两种单一食物的不同外观，则观察到不同的外观。接下来，检查基因表达的变化以阐明单独使用或组合使用时差异。结果，观察到在细胞壁合成，TeicoAcid合成，厌氧呼吸，铁载体合成等中观察到的表达增加。还进行了一项初步研究，以评估金黄色葡萄球菌全身感染的小鼠模型中的治疗功效。在使用单一药物的急性毒性研究中已经揭示了致命的剂量，从而可以制定剂量计划进行治疗研究。