ヒトRNAポリメラーゼと基本転写因子TFIIHとの複合体の構造モデルの構築

人RNA聚合酶与碱性转录因子TFIIH复合物结构模型的构建

• 批准号: 21K06035
• 负责人: 奥田 昌彦
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06035/
• 关键词: RNAポリメラーゼ; 基本転写因子; タンパク複合体; NMR; 立体構造

RNAポリメラーゼ(RNAP)と基本転写因子TFIIHはどちらも10個以上のサブユニットから成る超分子複合体であり、構造の大部分はX線結晶回折法(X線)やクライオ電子顕微鏡(電顕)によって解かれている。しかし、外に突き出たテールやドメイン等は運動性が高い為に見えない。申請者らは、既知のRNAPとTFIIHのX 線構造解析や電顕構造解析で見えていない領域間の新たな相互作用を見出した。本研究では、見えている領域を含んだ相互作用領域の複合体構造を核磁気共鳴 (NMR)法で決定し、見えていない領域を含むRNAPとTFIIHとの複合体の構造モデルを構築する。本年度は、RNAPサブユニットとTFIIH p62サブユニットの複合体のNMR構造を決定した。13C,15N標識 RNAP サブユニットと非標識 TFIIH p62 サブユニットの複合体と13C,15N 標識 TFIIH p62 サブユニットと非標識 RNAP サブユニットの複合体を調製し、多次元NMR 測定、及び解析を行った。距離、及び二面角制限情報を収集後構造計算し初期構造を得た。精密化を繰り返し、最終構造を決定した。

RNA聚合酶（RNAP）和基本转录因子TFIIH都是由10个以上亚基组成的超分子复合物，并且它们的大多数结构已通过X射线晶体衍射（X射线）或冷冻电子显微镜（电子显微镜）来解决。但是，由于其高迁移率，尾巴和域向外伸出。申请人发现未知RNAP和TFIIH X射线与电子微观结构分析之间的新相互作用。在这项研究中，包含可见区域的相互作用区域的复杂结构由核磁共振（NMR）方法确定，并且构建了RNAP和TFIIH之间复合物的结构模型。今年，确定了RNAP和TFIIH P62亚基复合物的NMR结构。制备了13C，15N标记的RNAP亚基和未标记的TFIIH P62亚基，并制备了13C，15N标记的TFIIH P62亚基和未标记的RNAP亚基的复合物，并进行了多维NMR测量和分析。收集距离和二面角度极限信息并计算结构以获得初始结构。最终结构是通过重复完善的。

项目成果

Dynamic structures of intrinsically disordered proteins related to the general transcription factor TFIIH, nucleosomes, and histone chaperones

• DOI: 10.1007/s12551-022-01014-9
• 发表时间: 2022-11
• 期刊: Biophysical Reviews
• 作者: M. Okuda;Y. Tsunaka;Y. Nishimura

ヒトRNAポリメラーゼと基本転写/修復因子TFIIHの新たな相互作用の構造生物学的研究

人类RNA聚合酶与基本转录/修复因子TFIIH之间新型相互作用的结构生物学研究

• 发表时间: 2022
• 作者: 奥田昌彦;諏訪哲史;鈴木秀文;山口雄輝;西村善文
• 通讯作者: 西村善文

RNAポリメラーゼと基本転写/修復因子TFIIHの新たな相互作用

RNA聚合酶与基本转录/修复因子TFIIH之间的新型相互作用

• 发表时间: 2021
• 作者: 奥田昌彦;諏訪哲史;鈴木秀文;山口雄輝;西村善文
• 通讯作者: 西村善文