低コストウニ用配合飼料の開発を目指した核内受容体COUP-TFのリガンドの特定

核受体COUP-TF配体的鉴定用于开发低成本海胆配合饲料

• 批准号: 21K05778
• 负责人: 浦 和寛
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K05778/
• 关键词: ウニ; 生殖巣; 核内受容体; COUP-TF; リガンド; レポーターアッセイ; 初代細胞培養系; 主要卵黄タンパク質; 養殖

本研究の最終目標は、低コストウニ用配合飼料の開発を目指している。この最終目標を実現するために、本研究では、ウニ生殖巣の肥大に伴う栄養の合成・蓄積に最も関与している核内受容体COUP-TFのリガンドを特定することを第一目標とする。COUP-TFは、無脊椎動物から脊椎動物において存在し、タンパク質・糖・脂質類の合成を制御している。未だ生体内のリガンドは不明である。ウニ生殖巣の肥大時にタンパク質・糖・脂質類の合成・蓄積が核内受容体の制御によりなされている科学的根拠を基にして本研究で明らかにするCOUP-TFのリガンドを含む低コスト天然素材を用いウニ用配合飼料の設計に応用する。MYPプロモーター領域を組み込んだレポーターアッセイ系を構築し、ウニ生殖巣中の総脂質の中で活性の高い分画を得た。この分画に含まれる脂肪酸類を同定し、標準品を用いてレポーターアッセイ系によりリガンドの探索を行った。結果、活性の高い脂肪酸は同定できなかった。このことから、活性の高い分画を更に分画しながら活性の高い分画を得た後にレポーターアッセイ系を用いてリガンドの絞り込みが必要であることが明らかになった。これらの研究に加え、ウニ生殖巣中でMYPは、栄養細胞で合成されていることからウニ生殖巣の初代細胞培養系の構築を行った。この初代細胞培養系を用いながらレポーターアッセイ系と並行してリガンドの探索を予定している。現在、確立した初代細胞培養系は、長期間細胞が活性を持たないことが明らかになったことから、培養液、培養温度を検討する必要性が残された。

这项研究的最终目的是开发基于低成本的二芯饲料。为了实现这一最终目标，我们的主要目标是确定核受体政变 - TF的配体，这些配体与海胆性腺肥大相关的养分的合成和积累。 coup-tf存在于无脊椎动物和脊椎动物中，并调节蛋白质，糖和脂质的合成。体内配体仍然未知。基于科学证据表明，蛋白质，糖和脂质是通过控制核受体在海胆性腺增长过程中合成和积累的，这项研究将使用含有coupy-tf配体的低成本天然材料，这些型在本研究中被揭示，以应用于海毒素饲料的设计。构建了结合MYP启动子区域的记者测定系统，以在海胆性腺中的总脂质中获得高度活性的分数。鉴定了该馏分中包含的脂肪酸，并使用标准产品使用记者测定法搜索配体。结果，无法鉴定出高度活性的脂肪酸。这表明在获得高度活性的分数后，在进一步分馏高度活性的分数后，有必要使用记者测定系统缩小配体的缩小。除了这些研究外，我们还构建了一种用于海胆性腺的原代细胞培养系统，因为MYP是在海胆性腺中的营养细胞中合成的。使用此原代细胞培养系统，计划与报告基督测定系统并行搜索配体。据揭示，在当前建立的原代细胞培养系统中，这些细胞在很长一段时间内没有活性，并且仍然必须检查培养基和培养温度。