低コストウニ用配合飼料の開発を目指した核内受容体COUP-TFのリガンドの特定

核受体COUP-TF配体的鉴定用于开发低成本海胆配合饲料

• 批准号: 21K05778
• 负责人: 浦 和寛
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K05778/
• 关键词: ウニ; 生殖巣; 核内受容体; COUP-TF; リガンド; レポーターアッセイ; 初代細胞培養系; 主要卵黄タンパク質; 養殖

本研究の最終目標は、低コストウニ用配合飼料の開発を目指している。この最終目標を実現するために、本研究では、ウニ生殖巣の肥大に伴う栄養の合成・蓄積に最も関与している核内受容体COUP-TFのリガンドを特定することを第一目標とする。COUP-TFは、無脊椎動物から脊椎動物において存在し、タンパク質・糖・脂質類の合成を制御している。未だ生体内のリガンドは不明である。ウニ生殖巣の肥大時にタンパク質・糖・脂質類の合成・蓄積が核内受容体の制御によりなされている科学的根拠を基にして本研究で明らかにするCOUP-TFのリガンドを含む低コスト天然素材を用いウニ用配合飼料の設計に応用する。MYPプロモーター領域を組み込んだレポーターアッセイ系を構築し、ウニ生殖巣中の総脂質の中で活性の高い分画を得た。この分画に含まれる脂肪酸類を同定し、標準品を用いてレポーターアッセイ系によりリガンドの探索を行った。結果、活性の高い脂肪酸は同定できなかった。このことから、活性の高い分画を更に分画しながら活性の高い分画を得た後にレポーターアッセイ系を用いてリガンドの絞り込みが必要であることが明らかになった。これらの研究に加え、ウニ生殖巣中でMYPは、栄養細胞で合成されていることからウニ生殖巣の初代細胞培養系の構築を行った。この初代細胞培養系を用いながらレポーターアッセイ系と並行してリガンドの探索を予定している。現在、確立した初代細胞培養系は、長期間細胞が活性を持たないことが明らかになったことから、培養液、培養温度を検討する必要性が残された。

这项研究的最终目标是开发一种低成本的海胆配合饲料。为了实现这一最终目标，本研究的首要目标是确定核受体COUP-TF的配体，该配体主要参与与海胆性腺增大相关的营养物质的合成和积累。 COUP-TF 存在于无脊椎动物和脊椎动物中，控制蛋白质、糖和脂质的合成。体内配体仍然未知。基于海胆性腺增大过程中蛋白质、糖和脂质的合成和积累受到核受体控制的科学证据，这项研究揭示了一种含有 COUP-TF 配体的低成本天然材料。应用于海胆配合饲料的设计。我们构建了一个包含 MYP 启动子区域的报告分析系统，并获得了海胆性腺中总脂质的高活性部分。鉴定了该级分中所含的脂肪酸，并使用标准产品的报告分析系统搜索配体。结果，无法鉴定出高活性脂肪酸。由此可知，需要将高活性级分进一步分级，得到高活性级分，然后使用报告分析系统缩小配体范围。除了这些研究之外，由于MYP是在海胆性腺的营养细胞中合成的，因此我们构建了海胆性腺的原代细胞培养系统。我们计划使用这种原代细胞培养系统与报告分析系统并行地寻找配体。由于已经清楚目前建立的原代细胞培养系统中的细胞在很长一段时间内不具有活性，因此仍然需要考虑培养基和培养温度。