魚病ウイルスVLPワクチン開発とそれを足場としたワクチン分子設計の技術基盤構築

鱼病病毒VLP疫苗的研制及以此为支架的疫苗分子设计技术基础的构建

• 批准号: 21K05728
• 负责人: 玉城 志博
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: University of the Ryukyus
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K05728/
• 关键词: 魚病ワクチン; 魚病ウイルス; ウイルス様粒子（VLPs）; 分子設計; 分子足場（scaffold）; 足場（scaffold）

魚病ウイルス（特許申請前につきウイルス名は秘匿としています）に対して、大腸菌発現によるウイルス様粒子（Virus-like particles: VLPs）ワクチンを開発する。現行の魚病ワクチンの多くは不活化ワクチンであり、ウイルスを株化細胞等で増殖させ、ホルマリン等で不活化するため高価になりがちである。しかし、我々が開発中のVLPsワクチンは、大腸菌発現系で大量に製造可能なため、製造コストを大幅に抑えることができ、これまでコスト的な問題で適応が難しかった多くの魚病ウイルス感染症や海外での使用拡大も可能となる。令和４年度は、VLPs抗原ならびに発現レベルが向上した分子改変VLPs抗原のワクチン効果を検証した。すなわち、これら２種類のVLPs抗原を試験魚へ投与し、その抗原特異的抗体価を測定したところ、優位に高い抗体価が誘導されていることが分かった。また、病原性ウイルス株を用いた攻撃試験を実施したところ、優位に高いワクチン効果を示した。また、前記VLPs抗原の分子構造的特性に着目し、本来VLPs形成が困難な他の魚病ウイルス抗原を前記VLPs抗原表層上に提示した粒子状構造（「疑似ウイルス様粒子（Pseudovirus-like particles: PVLPs）」）の開発において令和３年度に抗原コンストラクトを構築したので、令和４年度はこのコンストラクトを用いて大腸菌で発現させ、その生化学的解析を実施した。その結果、PVLPは大腸菌で可溶性発現し、発現した抗原を精製後に電子顕微鏡で撮影したところ、VLPsを形成していることが分かった。

开发用于鱼类疾病病毒的病毒颗粒（病毒样颗粒：VLP）疫苗（在申请专利之前，病毒名称保密）。当前许多鱼类疾病疫苗被灭活，并且往往很昂贵，因为它们用储存的细胞增殖病毒，并被福尔马林灭活。但是，我们正在开发的VLP疫苗可以大量生产在大型细菌表达系统中，因此我们可以显着降低制造成本，并且到目前为止很难适应我们的使用。在Oruwa的第四年中，检查了VLPS抗原和分子修饰VLPS抗原效应，从而提高了表达水平。换句话说，当将这两种VLP抗原施用用于测试鱼时，并测量了抗原特异性抗体价格时，发现高抗体被诱导为主导。此外，使用致病病毒菌株的攻击测试显示出高质量的疫苗作用。此外，在VLPS抗原（“伪病毒样颗粒（伪病毒颗粒））上，介绍了最初很难形成VLP的VLP抗原和其他FISH病毒抗原的分子结构特征，这些抗原最初很难形成VLP。 ））），并且由于制定了法律的制定是在Oruwa的第三年建立的，因此在原产地的第四年中表达了这一限制，并实施了其生化分析。结果，发现PVLP可溶于大肠杆菌，当纯化后用电子显微镜拍摄代表的抗原时，形成了VLP。

项目成果

Highly efficient protein expression of Plasmodium vivax surface antigen, Pvs25, by silkworm and its biochemical analysis.

家蚕高效表达间日疟原虫表面抗原 Pvs25 蛋白及其生化分析。

• DOI: 10.1016/j.pep.2022.106096
• 发表时间: 2022
• 期刊: Protein Expression and Purification
• 影响因子: 1.6
• 作者: Miyata T;Minamihata K;Kurihara K;Kamizuru Y;Gotanda M;Obayashi M;Kitagawa T;Sato K;Kimura M;Oyama K;Ikeda Y;Tamaki Y;Lee JM;Sakao K;Hamanaka D;Kusakabe T;Tachibana M;Ibrahim HR
• 通讯作者: Ibrahim HR