Development of nobel assay methods for miRNA and adenine methyltransferase using FRET

使用 FRET 开发 miRNA 和腺嘌呤甲基转移酶的诺贝尔检测方法

• 批准号: 21K05120
• 负责人: 椛島 力
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nagasaki International University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K05120/
• 关键词: FRET; メチル化酵素; miRNA; アデニン; シトシン; マイクロRNA; メチル化; 蛍光共鳴エネルギー移動

申請者は、分析化学分野で広く使用されている蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)のバックグランドを大幅に低下させる方法を見出し、それを応用したDNA中のシトシンをメチル化する酵素の活性測定法を開発している。本研究課題では、この方法をもとに、様々な疾患に関与するマイクロRNA(miRNA)およびエピジェネティクスに関与しているアデニンのメチル化/脱メチル化酵素の簡便で特異的かつ高感度な測定法の開発を目的としている。miRNAは、様々な生命現象と関わっており、さらに各種がんや心疾患、ウイルス感染症など、種々の疾患のバイオマーカーとしても注目されている。また、miRNA中のアデニンもメチル化されることが報告され、アデニンメチル化酵素についても、これら疾患との関連性が注目されている。しかし、これらの検出・測定法は、特別な機器や試薬、煩雑な操作が必要である。本課題の目的とする検出・測定法は、特別な機器や試薬を必要とせず、非常に簡便な測定法であり、生命科学や医療分野における汎用性の高い新たな解析ツールとなり得ると考える。これまでに、シトシンおよびアデニンメチル化酵素について、エピジェネティクス研究で使用されているメチル化塩基を認識して切断できる制限酵素とFRETを組み合わせた、新規活性測定法を開発した。現在、生体試料中の酵素活性が測定できるか調査中である。miRNA検出系については、miRNAの配列に特異的な蛍光検出法を開発できた。現在、検出感度を高めるための磁気マイクロビーズを使用した、miRNAの効率的な回収方法、および、蛍光検出の条件を検討中である。

申请人发现了一种方法，可以显着减少荧光共振能量转移（FRET）的背景，该方法广泛用于分析化学领域，并开发了一种申请方法来确定DNA中甲基化细胞的酶的活性。基于这种方法，该研究主题旨在为腺嘌呤的甲基化/脱甲基酶开发一种简单，特异性和高度敏感的方法，该方法涉及各种疾病和表观遗传学。 miRNA参与了各种生命现象，并且也引起人们的注意，作为各种疾病，包括癌症，心脏病和病毒感染。还据报道，miRNA中的腺嘌呤是甲基化的，腺嘌呤甲基酶与这些疾病的关联也引起了人们的注意。但是，这些检测和测量方法需要特殊的设备，试剂和复杂的操作。检测和测量方法是该主题的目的，是一种非常简单的测量方法，不需要特殊的设备或试剂，被认为是生命科学和医学领域中一种新的，多功能的分析工具。到目前为止，我们已经开发了一种针对胞嘧啶和腺嘌呤甲基化酶的新型活性测定法，将FRET与可以识别和裂解表观遗传学研究中使用的甲基化碱的限制酶相结合。目前，我们正在研究是否可以测量生物样品中的酶活性。关于miRNA检测系统，已经开发了miRNA序列的荧光检测方法。当前，我们正在考虑使用磁微粒来恢复miRNA的有效方法，以提高检测敏感性和荧光检测条件。

项目成果

A Facile Method to Determine Prolidase Activity Using a Peptide-Specific Fluorometric Reaction

使用肽特异性荧光反应测定脯氨酸酶活性的简便方法

• DOI: 10.1248/cpb.c22-00467
• 发表时间: 2023
• 期刊: Chemical and Pharmaceutical Bulletin
• 影响因子: 1.7
• 作者: Tsutomu Kabashima; Nana Hamasaki;Keiko Tonooka and Takayuki Shibata
• 通讯作者: Keiko Tonooka and Takayuki Shibata

Extremely Simple and Rapid HPLC Analysis of Tocilizumab in Human Serum with Selective Precipitation Using Alkylamine

使用烷基胺选择性沉淀对人血清中托珠单抗进行极其简单快速的 HPLC 分析

• DOI: 10.1248/cpb.c22-00475
• 发表时间: 2023
• 期刊: Chemical and Pharmaceutical Bulletin
• 影响因子: 1.7
• 作者: Takada Makoto;Watanabe Ichika;Naito Kazuya;Mutoh Junpei;Ohba Yoshihito;Kabashima Tsutomu;Wada Mitsuhiro
• 通讯作者: Wada Mitsuhiro

Adverse Events Following COVID-19 Vaccination in Young Japanese People: A Case-Control Study of the Risk of Systemic Adverse Events by A Questionnaire Survey

日本年轻人接种 COVID-19 疫苗后的不良事件：通过问卷调查进行全身不良事件风险的病例对照研究

• DOI: 10.26502/acbr.50170222
• 发表时间: 2022
• 期刊: Archives of Clinical and Biomedical Research
• 作者: Suehiro Marie;Okubo Shinya;Nakajima Kensuke;Kanda Kosuke;Hayakawa Masanobu;Oiso Shigeru;Kabashima Tsutomu;Fujita Hideaki;Ando Yukio;Muro Takahiro
• 通讯作者: Muro Takahiro

A Facile Method for the Quantification of Urinary Uracil Concentration by a Uracil-Specific Fluorescence Derivatization Reaction

通过尿嘧啶特异性荧光衍生反应定量尿尿嘧啶浓度的简便方法

• DOI: 10.1248/cpb.c21-00221
• 发表时间: 2021
• 期刊: Chemical and Pharmaceutical Bulletin
• 影响因子: 1.7
• 作者: Shibata Takayuki;Shimamura Ryosuke;Yamamoto Yuji;Sakurai Hiroki;Fujita Junya;Yamayoshi Asako;Nemoto Toshimitsu;Kabashima Tsutomu
• 通讯作者: Kabashima Tsutomu

ケトプロフェン含有ナノ粒子製剤の調製

含酮洛芬纳米颗粒制剂的制备

• 发表时间: 2021
• 作者: 神谷誠太郎;河津祐輝;椛島力
• 通讯作者: 椛島力