バイオ医薬品生産細胞における老化現象の解明と制御

生物制药生产细胞老化现象的阐明和控制

基本信息

批准号：
21K04794
负责人：
鬼塚正義
金额：
$ 2.58万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、抗体医薬品生産における長期間の動物細胞培養時に生じる細胞の老化現象と生産抗体の品質の関連性の解明を目的としている。R4年度はより本格的な培養のために、2Lスケール培養槽とATFシステムを用いた灌流培養を実施した。培養途中で培地の灌流率(培地交換速度)を変更し、長期培養と共に培地中の栄養源がIgG1抗体生産量および抗体品質に与える影響を解析した。Run1（22日間培養）の灌流培養では培養途中で灌流率(培地交換速度)を変更し、投入する栄養源量を低下させてその影響を解析した。結果、抗体N型糖鎖末端のガラクトシル化が急激に減少し、Fcレセプターへの結合能力が低い抗体が分泌されていた。Run2（39日間培養）では灌流率を一定に保ちつつブリーディング操作により、維持細胞数を変化させながら培養を実施した。維持した生細胞密度に応じて抗体N型糖鎖のガラクトシル化は変化した。2回のRunより、細胞に対する栄養源相対量がN型糖鎖修飾に影響を与えることが示唆された。細胞分裂に応じて老化が進行すると考えられるため、灌流培養などの連続生産では細胞が目的密度に達した後は、細胞が増殖しない条件下で細胞維持することが望ましいとされている。2回のRunから、細胞維持（増殖なし）の条件設定に関する指標を得ることが出来たと評価している。また細胞老化や抗体品質に影響を与えうると想定した各酵素についてスケールアップ培養（100mL）を行った。培養上清ならびに細胞沈殿を保管したので、精製後、酵素活性を測定する。

这项研究旨在阐明在抗体药物产生中长期动物细胞培养期间发生的细胞衰老现象与产生抗体的质量之间的关系。 2014年，使用2L量表培养箱和ATF系统进行灌注培养，以进行更严肃的培养。在培养过程中，培养基的灌注率（中汇率）发生了变化，并分析了培养基中养分来源对IgG1抗体产生和抗体质量以及长期培养的影响。在Run1的灌注培养物（培养22天）中，在培养过程中改变了灌注率（中型汇率），并减少了要应用的养分来源的量，并分析了效果。结果，迅速降低了抗体N型聚糖末端的半乳糖基化，并且分泌具有与FC受体结合能力较低的抗体。在Run2（培养39天）中，在通过出血过程更改维持细胞的数量的同时，在保持灌注速率常数的同时进行培养。抗体N-糖基化的半乳糖基化根据维持的活细胞密度而变化。两次运行表明，相对量的养分来源与细胞的相对量会影响N型聚糖的修饰。由于人们认为衰老会响应细胞分裂而进行，因此据信，在灌注培养物等连续产生中，希望在细胞达到靶密度后不会增殖的条件下维持细胞。据估计，这两种运行使我们能够获得有关细胞维护设置（无扩散）的指标。此外，假定每种酶对细胞衰老和抗体质量有影响，都受到了扩大培养（100 mL）。由于存储培养的上清液和细胞沉淀，因此在纯化后测量酶活性。

项目成果

期刊论文数量（11）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

動物細胞を利用したタンデム型二重特異性 scFv 抗体の製造適合性評価

使用动物细胞制造串联双特异性 scFv 抗体的适用性评估

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
森田　俊哉;吉本　則子;西岡美玖，西岡美穂，小川紗也香，金山直樹，波多野直哉，徳光浩，曲正樹;福間奈々子，天羽宏枝，伊藤洋一郎，石井純，近藤昭彦，梅津光央，鬼塚正義
通讯作者：
福間奈々子，天羽宏枝，伊藤洋一郎，石井純，近藤昭彦，梅津光央，鬼塚正義

抗体医薬品製造　～基礎から基盤技術開発まで～

抗体药物制造～从基础知识到基础技术开发～