炎症時におけるアデノシン動態変化が肝線維化へのスイッチシグナルとして働く可能性

炎症期间腺苷动力学的变化可能是肝纤维化的开关信号

• 批准号: 21J15529
• 负责人: 土肥 直貴
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: University of Shizuoka
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-28 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21J15529/
• 关键词: 肝星細胞; 肝線維化; NAFLD; NASH; アデノシン; PGE2

目的①：前年度に見出したGSTA4の発現調節に関して、ヒトHSC株LX-2細胞を用いて検討した。レポーターアッセイより、TGF-β存在下においてcaffeine（CAF）とPGE2併用時にGSTA4の転写を制御する転写因子NRF2の活性が増加することが示唆された。さらに、免疫染色によりTGF-β存在下においてCAF とPGE2併用時にNRF2の核移行が促進することが示唆された。NRF2はKEAP1により抑制性に制御されるが、p62はリン酸化と凝集体形成により活性化し、KEAP1の分解を促進させることが報告されている。そこで、マウス初代培養細胞HSCにおける総p62およびリン酸化体p62の凝集体形成を免疫染色により観察した。その結果、CAF またはPGE2の単独処置とは異なり、CAF とPGE2併用時には総p62およびリン酸化体p62の凝集体形成が確認された。これらの結果より、HSCにおいてCAF とPGE2の併用処置はp62のリン酸化および凝集体形成を促進し、これによるNRF2の核移行および転写促進を介したGSTA4の発現亢進が、HSCの活性化を抑制することが示唆された。目的②：前年度に得られた知見をもとに、脂肪酸負荷による肝実質細胞のアデノシン（ADO）代謝への影響を解析した。その結果、AML-12細胞においてパルミチン酸とオレイン酸の処置により、細胞外ADO産生酵素CD39の増加、ADOトランスポーターENTの減少傾向、培地中ADO濃度の増加がみられた。さらに脂肪酸負荷AML-12細胞をマウス初代培養細胞HSCと非接触状態で共培養するとHSCの活性化が促進した。これらの結果より、肝実質細胞における脂肪蓄積はADOの産生増加および代謝減少を引き起こし、これにより遊離ADO濃度が上昇することでHSCの活性化を促進させ、肝線維化を誘発する可能性が示された。

目标1：使用人HSC菌株LX-2细胞研究了上一年发现的GSTA4表达的调节。记者分析表明，在TGF-β存在下，与咖啡因（CAF）和PGE2结合使用时调节GSTA4转录的转录因子NRF2的活性会增加。此外，免疫染色表明，在存在TGF-β的情况下与CAF和PGE2合并时，促进了NRF2核转运。 NRF2受KEAP1的抑制作用，但p62被磷酸化和骨料形成激活，并据报道促进KEAP1的降解。因此，通过免疫染色可以观察到小鼠原代培养细胞中总p62和磷酸化p62的骨料形成。结果，与仅CAF或PGE2不同，当使用CAF和PGE2组合使用CAF和PGE2时，确认了总p62和磷酸化的p62骨料的形成。这些结果表明，CAF和PGE2的联合处理可促进HSC中的p62磷酸化和骨料形成，并且通过NRF2的核转运和转录促进增强了GSTA4的表达，并抑制了HSC的激活。目标2：根据上一年获得的发现，我们分析了脂肪酸负荷对肝实质细胞中腺苷（ADO）代谢的影响。结果，用棕榈酸和油酸治疗显示细胞外脂外产生的酶CD39的增加，ADO转运蛋白ENT的降低以及培养基中ADO浓度的增加。此外，脂肪酸加载的AML-12细胞与原代小鼠培养的HSC共同培养促进了HSC的激活。这些结果表明，肝实质细胞中的脂肪积累会导致产生增加和ADO代谢降低，这可以通过增加游离ADO浓度来促进HSC的激活，从而导致肝纤维化。

项目成果

NASH 進展時のアデノシン動態に着目した肝星細胞活性化制御機構に対する GSTA4の役割

GSTA4在肝星状细胞激活控制机制中的作用，重点关注NASH进展过程中的腺苷动力学

• 发表时间: 2022
• 作者: Yamaguchi Keiichi;Imai Tomohiro;Yatsutani Haruka;Goto Kazushige;土肥直貴，山口桃生，渡辺雄太，齊藤真也，石川智久
• 通讯作者: 土肥直貴，山口桃生，渡辺雄太，齊藤真也，石川智久

Caffeine-induced inversion of prostaglandin E2 effects on hepatic stellate cell activation

咖啡因诱导的前列腺素 E2 对肝星状细胞活化作用的逆转

• DOI: 10.1016/j.biopha.2021.111989
• 发表时间: 2021
• 期刊: Biomedicine & Pharmacotherapy
• 作者: Yamaguchi Momoka;Dohi Naoki;Ooka Akira;Saito Shin-ya;Ishikawa Tomohisa
• 通讯作者: Ishikawa Tomohisa