Development of cell-penetrating anti-rabies virus neutralizing monoclonal antibodies

细胞穿透性抗狂犬病病毒中和单克隆抗体的开发

基本信息

批准号：
21J13419
负责人：
板倉友香里
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-28 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21J13419/
关键词：
狂犬病ウイルス抗体抗体療法細胞膜透過性ペプチド

项目摘要

当該年度は、組換えP蛋白質を免疫したマウス個体より、ハイブリドーマを取得した。ELISAにより、P蛋白質に対して高い結合性を示す96クローンを選抜し、ハイブリドーマがコードする抗体の重鎖、軽鎖の可変領域遺伝子のクローニングを試みた。しかしながら、ハイブリドーマ1クローンに対して、複数の遺伝子配列が存在し、且つストップコドンを有する配列が含まれることが明らかとなった。さらに、ハイブリドーマ取得に用いたミエローマが軽鎖遺伝子を有していた。これらの問題により、ハイブリドーマが実際に産生する抗体をコードする遺伝子配列の取得が困難であった。そこで、各クローンの抗体の可変領域遺伝子配列を次世代シークエンサーで解析し、30クローンを選抜した。現在、選抜したクローンの抗体遺伝子のクローニング、及び組換え蛋白質としてモノクローナル抗体の作製を進めており、今後P蛋白質に対する結合性をELISAにより確認する。さらに、昨年度検討した細胞膜透過性ペプチド配列を付加し、組換え蛋白質として細胞内移行型のモノクローナル抗体を作出する。最終的に、細胞内移行型モノクローナル抗体のRABV感染細胞における中和能、RABV感染マウスにおける治療効果、及び異なるウイルス蛋白質を標的としたモノクローナル抗体とのカクテル剤としての治療効果の評価を計画している。また、ウイルス感染症の治療法開発研究において、ウイルスの感染増殖機構に関する理解は必要不可欠である。当該年度は、宿主因子であるTSG101がRABVの出芽、及び粒子形成に重要な役割を果たすことを明らかにし、論文として報告した（Itakura Y et al., J Virol, 2023, in press）。本結果はRABVの増殖機構の一端を解明するものであり、狂犬病の治療法の開発に貢献することが期待される。

今年，从用重组P蛋白免疫的小鼠个体中获得了杂交瘤。我们通过ELISA筛选出96个与P蛋白高度结合的克隆，并尝试克隆杂交瘤编码的抗体重链和轻链可变区基因。然而，已经清楚的是，一个杂交瘤克隆有多个基因序列，包括带有终止密码子的序列。此外，用于获得杂交瘤的骨髓瘤具有轻链基因。这些问题使得很难获得编码杂交瘤实际产生的抗体的基因序列。因此，使用二代测序仪对各克隆的抗体可变区基因序列进行分析，选出30个克隆。我们目前正在克隆所选克隆的抗体基因，并生产作为重组蛋白的单克隆抗体，我们将通过 ELISA 确认其与 P 蛋白的结合。此外，我们将添加去年研究的细胞膜渗透性肽序列，以创建作为重组蛋白渗透到细胞中的单克隆抗体。最后，我们计划评估细胞内单克隆抗体在RABV感染细胞中的中和能力、在RABV感染小鼠中的治疗效果，以及作为针对不同病毒蛋白的单克隆抗体的混合剂的治疗效果。此外，在开发病毒感染治疗方法的研究中，了解病毒的感染和传播机制至关重要。今年，我们发现宿主因子 TSG101 在 RABV 出芽和颗粒形成中发挥重要作用，并在论文中报道了这一点（Itakura Y et al., J Virol, 2023, in press）。这些结果揭示了RABV增殖机制的一部分，预计将有助于狂犬病治疗方法的开发。

项目成果

期刊论文数量（11）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

A novel nairovirus associated with acute febrile illness in Hokkaido, Japan.

DOI：
10.1038/s41467-021-25857-0
发表时间：
2021-09-20
期刊：
Nature communications
影响因子：
16.6
作者：
Kodama F;Yamaguchi H;Park E;Tatemoto K;Sashika M;Nakao R;Terauchi Y;Mizuma K;Orba Y;Kariwa H;Hagiwara K;Okazaki K;Goto A;Komagome R;Miyoshi M;Ito T;Yamano K;Yoshii K;Funaki C;Ishizuka M;Shigeno A;Itakura Y;Bell-Sakyi L;Edagawa S;Nagasaka A;Sakoda Y;Sawa H;Maeda K;Saijo M;Matsuno K
通讯作者：
Matsuno K

狂犬病ウイルス感染増殖過程におけるESCRT-1構成因子TSG101の役割

ESCRT-1成分TSG101在狂犬病病毒感染和增殖过程中的作用