最新分子生物学的アプローチによる放射線感受性メカニズムの解明

使用最新的分子生物学方法阐明放射敏感性机制

• 批准号: 21H04844
• 负责人: 千葉 満
• 金额: $ 21.88万
• 依托单位: Hirosaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-05 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H04844/
• 关键词: 放射線感受性; ゲノム編集; CRISPR/Cas9; 放射線耐性; 放射線抵抗性; マイクロアレイ; HL60; A549; miRNA; ラジオロミクス解析; ラジオロミクス; エクソソーム; バイスタンダー効果; HL-60; mRNA; 遺伝子発現

2022年度は研究計画の通り、前年度樹立したヒト前骨髄球性白血病細胞株（HL60）の放射線耐性細胞株の遺伝子発現データの分析を実施した。得られた成果を以下に示す。①放射線耐性細胞株の樹立：放射線感受性の異なる培養細胞株を樹立するために、ヒト前骨髄球性白血病細胞株（HL60）に4 GyのX線（1.0 Gy/min, 150 kV, 20 mA, 0.5 mmアルミニウム+0.3 mm銅フィルター）を4週にわたり照射し、増殖してきた生存細胞を放射線耐性細胞株（Res-HL60）とした。対象として放射線照射せずに培養したHL60をWt-HL60とした。現在肺癌細胞株A549についても放射線耐性細胞株の樹立を行っている。②遺伝子発現解析（miRNA）：Wt-HL60とRes-HL60においてどのような遺伝子発現変化が生じているか調べるために、まずmiRNAマイクロアレイ解析を行った。アレイ間の正規化やフィルタリング処理を様々な条件で検討し、スチューデントt検定とFold change解析を行った。分位数正規化と発現量フィルタリングをシグナル値50で処理したところ、発現上昇するmiRNAは5つ、発現低下するmiRNAは6つあった（p<0.05）。現在miRNA強制発現させるプラスミドを構築しており、同定されたmiRNAが放射線耐性へ影響を及ぼすか検討している。③遺伝子発現解析（mRNA）：上記にあわせてmRNAマイクロアレイ解析も行っており、すでにデータを取得している。現在放射線耐性能獲得に関連する新規遺伝子候補の絞り込みを進めている。新規遺伝子の機能解析のために、生存アッセイ、DNA損傷解析、アポトーシス解析などを検討する。A549についても同様の遺伝子発現解析を実施していく。

在2022年，根据研究计划，我们分析了前一年建立的人类前临床白血病细胞系（HL60）的抗辐射细胞系（HL60）的基因表达数据。获得的结果如下所示。 1. Establishment of radiation-resistant cell lines: To establish cultured cell lines with different radiation sensitivity, human promyelocytic leukemia cell lines (HL60) were irradiated with 4 Gy X-rays (1.0 Gy/min, 150 kV, 20 mA, 0.5 mm aluminum + 0.3 mm copper filter) for four weeks, and the proliferating viable cells were used as radiation-resistant cell lines （RES-HL60）。没有辐射培养的HL60用作WT-HL60。目前，肺癌细胞系A549也被确定为抗辐射细胞系。 2）基因表达分析（miRNA）：首先进行miRNA微阵列分析，研究在WT-HL60和RES-HL60中发生的基因表达的变化。在各种条件下检查了阵列之间的归一化和过滤，并进行了学生的t检验和折叠变化分析。用信号值为50处理分位数的归一化和表达水平滤波，并且有5个miRNA升高，6个miRNA降解（p <0.05）。我们目前正在构建一种用于强制表达miRNA的质粒，并正在研究确定的miRNA是否会影响辐射抗性。 ③基因表达分析（mRNA）：与上述同时，也进行了mRNA微阵列分析，并且已经获取了数据。目前，我们正在缩小与获得辐射抗性有关的新基因候选者。为了对新基因的功能分析，将研究生存测定，DNA损伤分析，凋亡分析等。 A549将进行类似的基因表达分析。

项目成果

Hepatic gene expression and functional changes associated with nonalcoholic steatohepatitis

与非酒精性脂肪性肝炎相关的肝脏基因表达和功能变化

• DOI: 10.3892/mmr.2022.12841
• 发表时间: 2022
• 期刊: Molecular Medicine Reports
• 影响因子: 3.4
• 作者: Matsumoto Kana;Kato Yumiko;Hayashi Momone;Miura Risa;Monzen Satoru;Chiba Mitsuru
• 通讯作者: Chiba Mitsuru

Changes in miRNA expressions in the injured small intestine of mice following high-dose radiation exposure

• DOI: 10.3892/mmr.2020.11054
• 发表时间: 2020-06-01
• 期刊: MOLECULAR MEDICINE REPORTS
• 影响因子: 3.4
• 作者: Chiba, Mitsuru;Uehara, Haruka;Monzen, Satoru
• 通讯作者: Monzen, Satoru

Dose-dependent expression of extracellular microRNAs in colorectal cancer cell line HCT116 exposed to high&#8209;dose&#8209;rate ionising radiation

暴露于高浓度的结直肠癌细胞系 HCT116 中细胞外 microRNA 的表达呈剂量依赖性

• 发表时间: 2022
• 作者: 松本佳菜;千葉満;杉山 彦斗;千葉 満;森野 友貴;山根 一真;菊池 愛;門前 暁;門前 暁;千葉 満;真里谷 靖;千葉 満;松本 佳菜;門前 暁;真里谷 靖;Satoru Monzen;Tatsuya Ueno;Mitsuru Chiba;Yasushi Mariya;Andrzej Wojcik;Lovisa Lundholm
• 通讯作者: Satoru Monzen;Tatsuya Ueno;Mitsuru Chiba;Yasushi Mariya;Andrzej Wojcik;Lovisa Lundholm

致死線量被ばくマウスにおける敗血症リスクと腸内細菌叢の生死の検討

检查暴露于致死剂量辐射的小鼠败血症风险和肠道菌群存活率

• 发表时间: 2022
• 作者: 松本佳菜;千葉満;杉山 彦斗;千葉 満;森野 友貴;山根 一真;菊池 愛;門前 暁;門前 暁;千葉 満;真里谷 靖;千葉 満;松本 佳菜;門前 暁;真里谷 靖;Satoru Monzen;Tatsuya Ueno;Mitsuru Chiba;Yasushi Mariya;Andrzej Wojcik;Lovisa Lundholm;Mitsuru Chiba;Kana Matsumoto;Risa Miura;Satoru Monzen;菅原直央;富岡明日香;辻口貴清;伊藤勝博;千葉満;藤岡美幸;山内可南子
• 通讯作者: 菅原直央;富岡明日香;辻口貴清;伊藤勝博;千葉満;藤岡美幸;山内可南子

Extracellular Vesiclesの細胞内取り込みメカニズム

细胞外囊泡的细胞内摄取机制

• 发表时间: 2021
• 期刊: 細胞
• 作者: 松本佳菜;千葉満
• 通讯作者: 千葉満