纳豆芽孢杆菌MenA的生物信息学分析及亚细胞定位

在这项研究中，我们对基于1,4-2-二氯酸-2-氯酸基于酸的酸转移（BSNMENA），功能机制和细胞定位以及本研究中使用的生物学信息进行了深入研究。引入IPTG后，IPTG被用来查看天空中细菌的亮点和细菌的光。 MENA属的属与MENA属高度相似，该物种接近该属，但在其家族中也提供了大量的Mena属。第一个已知的蛋白质是BSNMENA，它是一种膜偶联蛋白。结构总数序列显示在典型的UBIA结构范围内，包括34-278AA组的BSNMENA组，包括74-84AA总计为NXXXXXXXDXXD的204-212AA划分。通过折叠识别建模法，模拟出，bsnmena的三维空间结构，是由9个跨膜螺旋组成的一个活性中心腔，其中rich topifs位于胞质区loop的h23h67中h67中，这与匹配度最高的嗜热系古生细菌中的4-羟苯甲酸-聚异戊二烯转移酶-（apubia）极其相似，由于bsnmena与apubia与20分钟后，收集细菌并在细菌细胞附近点亮光，在细菌细胞的细胞膜上可见Ariake。一般而言，在BSNMENA（具有BSNMENA最重要的来源）中，生物学信息和细胞学学无法参考，该研究提供了对BSNMENA基础知识的深入研究，并且基本上提供了有关未知晶状体整合的研究。

为了深入研究纳豆芽孢杆菌中1,4- 二羟基-2- 萘甲酸聚异戊二烯转移酶(BsnMenA)的结构和功能、催化作用机制以及亚细胞定位,本研究首先利用生物信息学软件对BsnMenA的系统进化关系、基本性质、亚细胞定位、结构域和motifs以及空间结构等进行预测。另外还构建了纳豆芽孢杆菌menA和egfp荧光标签的重组菌MEP28和EMP28,通过IPTG诱导表达后,利用激光共聚焦显微镜观察重组菌中荧光所在的位置。系统进化树显示,芽孢杆菌属中的MenA高度相似,亲缘关系较近,但与大肠杆菌等其它科中的MenA亲缘关系较远。从理化性质及亚细胞定位预测,初步确定BsnMenA属于膜结合型蛋白质。结构域和motifs预测显示,BsnMenA的34-278aa组成典型的UbiA结构功能域,其中74-84aa和204-212aa分别存在NxxxDxxxxxD和NNxxDxxxD的Asp-rich motifs结构。通过折叠识别建模法,模拟出BsnMenA的三维空间结构,是由9个跨膜螺旋组成的一个活性中心腔,其中Asp-rich motifs位于胞质区loop的H23和H67中,这与匹配度最高的嗜热系古生细菌中的4- 羟苯甲酸- 聚异戊二烯转移酶(ApUbiA)极其相似,由于BsnMenA与ApUbiA空间结构高度相似,因此推导出BsnMenA的催化功能有关的保守结构域位点及其催化机制。对重组菌诱导表达20min后取样,通过激光共聚焦显微镜检测发现,在细菌的细胞膜上有明显可见荧光。通过生物信息学预测以及亚细胞定位实验不仅验证BsnMenA是膜蛋白酶,而且说明BsnMenA能在大肠杆菌中异源表达,这些理论为BsnMenA的深入研究提供理论基础,也为其它未知晶体结构酶的研究提供了有效的研究思路和方法。