Ras超家族亚群A/Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1在无机磷酸盐中诱导大鼠瓣膜间质细胞成骨分化的作用机制

目的是探索RAS Ultrafamily A组（RHOA）/RHO相关的含有弯曲螺旋关节蛋白（ROCK-1）的蛋白质，在骨化分化的非存在的大型细胞内细胞（VIC）中。方法：8）主体被雄性大鼠（上海西部大流行有限公司）消化为第三代免疫系统。小型RNA（siRNA） - RHOA染色包括非偶联的骨培养基团（IP-OIM），NC和空白（Con）的成骨分化，以及凝结（wester blot）和凝结（PCR），染色后，RhoA，Rock-1，Runt Runt相关的凝结因子2（Runcatuals 2（Runx-runx-Recogen）） d。14 d的活动之间的关系。 IP-OIM刺激后，VIC为60分钟，Western印迹Smad1/5/9被氧化。分析使用相同因子差异差异的因素。结果：完成VICS之后，sirna-rhoa的IP-OIM在完成Western Blot和PCR之后，Rhoa（Western Blot：0.330±0.020; PCR：0.357±0.060）和岩石1（Western Blot：0.366±0.020; 0.366±0.020; PCR：0.383±0.040） CR：T = 10.610，p <0.05;印迹：t = 31.240，p <0.05 pcr：t = 13.210，p <0.05），差异学术见解，rnai ost（western blot：0.520±0.030; pcr：0.510±0.070） ，p <0.05； t = 6.970，p <0.05;印迹：t = 21.040，p <0.05; RNAi在ALP染色期间，RNAi [（1.005±0.101）u/mg]活性比NC [（2.042±0.116）u/mg]总和[（1.931±0.136）U/mg] MelAngeal（t = 10.570，p <0.05;在确定相应的钢含量期间，RNAi [（22.290±1.981）ng/l]偏斜含量比NC [（41.100±2.440）ng/l]总和[（41.760±1.215）相同的RNAi脸。 IP-OIM分裂的刺激为60分钟，基于RNAi的SMAD1/5/9氧化水平（0.337±0.030）比率下降（t = 25.480，p <0.05）和分化的学术考虑。总之，RhoA/Rock-1会导致骨细胞分化，而SMAD1/5/9属的氧化在整个过程的整个过程中都很重要。

目的 探讨Ras超家族亚群A（RhoA）/Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1（Rock-1）在无机磷酸盐中诱导大鼠瓣膜间质细胞（VICs）成骨分化的作用机制。方法 取8只雄性大鼠（购自上海西普尔必凯动物实验有限公司）的主动脉瓣膜消化培养至第3代后免疫荧光鉴定。小干扰RNA（siRNA）-RhoA转染VICs后用无机磷酸盐成骨培养基（IP-OIM）分别诱导转染组（RNAi）,阴性对照组（NC）及空白对照组（CON）的成骨分化,并通过蛋白质印迹法（Western blot）与聚合酶链反应（PCR）评估转染后RhoA、Rock-1、Runt相关转录因子2（Runx-2）及骨钙素（OST）的变化；7 d行碱性磷酸酶（ALP）活性相关检测,14 d行钙含量相关检测评估其早期与晚期成骨分化趋势。用IP-OIM刺激转染后的VICs 60 min,并通过Western blot检测SMAD1/5/9的磷酸化变化。采用单因素方差分析。结果 鉴定后的VICs转染siRNA-RhoA并用IP-OIM培养,经过Western blot及PCR检测后可知RNAi的RhoA（Western blot：0.330±0.020；PCR：0.357±0.060）及Rock-1（Western blot：0.366±0.020；PCR：0.383±0.040）比CON均出现表达下调（RhoA Western blot：t＝36.680,P<0.05 PCR：t＝10.610,P<0.05；Rock-1 Western blot：t＝31.240,P<0.05 PCR：t＝13.210,P<0.05）,差异有统计学意义,RNAi的OST（Western blot：0.520±0.030；PCR：0.510±0.070）和Runx-2（Western blot：0.573±0.020；PCR：0.57±0.060）比CON也出现了下降（OST Western blot：t＝16.630,P<0.05；PCR：t＝6.970,P<0.05；Runx-2 Western blot：t＝21.040,P<0.05；PCR：t＝6.710,P<0.05）,差异有统计学意义。在7 d的ALP染色中RNAi的颜色最浅,ALP活性检测中RNAi [（1.005±0.101） U/mg]活性比较NC[（2.042±0.116） U/mg]和CON[（1.931±0.136） U/mg]明显下降（t＝10.570,P<0.05；t＝9.400,P<0.05）,差异有统计学意义。在14 d的相对钙含量测定中RNAi[（22.290±1.981） ng/L]钙含量比较NC[（41.100±2.440） ng/L]和CON[（41.760±1.215） ng/L]明显下降（t＝10.530,P<0.05；t＝14.510,P<0.05）,差异有统计学意义；同样茜素红钙沉积染色中,也是RNAi颜色最浅。经IP-OIM分别刺激60 min,RNAi的SMAD1/5/9的磷酸化水平（0.337±0.030）比CON明显下降（t＝25.480,P<0.05）,差异有统计学意义。结论 无机磷酸盐可通过RhoA/Rock-1引起瓣膜间质细胞的成骨分化,SMAD1/5/9的磷酸化在此过程中起重要作用。