葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）在高危型人乳头瘤病毒感染所致宫颈癌中的miR-1调控机制研究

Our previous study revealed that Glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) expressions in the high-risk human papillomavirus (HR HPVs) infected human cervical cancer (CC) tissues and cell lines play an important role in tumor growth and proliferation. Further miRNA array performed by our lab showed that G6PD expression interference induced expressional alterations of many miRNAs in HR HPV+ CC cells, including miR-1. By using bioinformatics prediction, G6PD is proposed as the target of miR-1. We propose that the possible tumorigenesis mechanisms of G6PD involved in HR HPV+ CC is associated with miR-1 regulation. Therefore, in the present study, we determine the expression of target G6PD regulation by specific miR-1 as well as the effects of miR-1 treatment on the growth and apoptosis of bearing CC, luciferase reporter assays, bearing cancer node mice model injected with specific miR-1 overexpression or silence sponge vectors transfected HR HPV+ CC cell lines in vivo and in vitro. The present study will reveal a novel role of miRNA for endogenous target G6PD regulation contributing to HR HPV-dependent activated pro-survival strategies in human CC, and suggest a possible relevance of miRNA and G6PD in drug/radiotherapy-resistance of HR HPV-bearing cervical carcinomas.

本课题组前期研究工作证实葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）的过度表达参与了高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染引致的宫颈癌致病过程，而G6PD干扰后HPV的人宫颈癌细胞株中检测到多种miRNA差异表达的情况，结合生物信息学预测结果，我们推测miR-1通过特异性的G6PD表达调控机制参与了HR-HPV+人宫颈癌致瘤与病情进展。本项目拟采用生物信息学预测、荧光素酶报告实验、miR-1过表达/Sponge载体转染HR-HPV+人宫颈癌细胞株，验证miR-1对G6PD的调控及对肿瘤细胞生长、增殖与凋亡的影响；同时，运用特异miR-1过表达或表达抑制的 HR-HPV+细胞株，制作裸鼠荷瘤模型，体内验证miR-1对G6PD的调控，观察miR-1对肿瘤生长、增殖的调控，旨在阐明HR-HPV+人宫颈癌致瘤与病情进展中miR-1对内源性G6PD调控的机制，为HR-HPV感染宫颈癌揭示了全新的治疗分子靶点。

近年来，宫颈癌（cervical cancers, CC）在我国呈现地区增长及发病年龄提前的现象，加强对宫颈癌的病因研究，阐明其发病机制，对于宫颈癌的防治意义重大。目前研究认为感染，而持续性的高危型（high-risk, HR）人乳头瘤病毒（human papillomavirus, HPV）感染是宫颈鳞癌和上皮内瘤变发生的必要因素，但是，HR HPV感染在CC致瘤的分子机制仍未阐明。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（Glucose-6-phosphate dehydrogenase, G6PD）是磷酸戊糖途径关键酶，因其通过PPP 途径产生核糖及NAPDH，而被认为参与了肿瘤的存活和生长。本课题组综合前期研究发现及文献报道，推测G6PD 的表达异常可能参与了HR HPV 感染引致的宫颈癌发生发展过程，但是，具体作用机制不清楚。本研究完成了体内外验证 miR-1 对 G6PD 的调控作用研究；构建了miR-1过表达慢病毒载体以及miR-1低表达Sponge载体，通过转染体外培养高危型人乳头瘤病毒（HR HPV 16/18 ）感染阳性（+）宫颈癌细胞株（Siha 和 Hela）、裸鼠成瘤模型的制作，研究了miR-1 对 G6PD 的调控在 HR HPV 16/18+宫颈癌细胞及宫颈癌细胞移植瘤内生长、增殖、凋亡中的作用，并检测了miR-1过表达及表达抑制后HR HPV 16/18+宫颈癌细胞以及移植瘤组织内中细胞周期蛋白、凋亡相关蛋白的表达变化，本研究验证了miR-1 对 G6PD 的直接调控作用，包括表达水平及活性的调节；证实miR-1通过对G6PD的调控抑制了HR HPV 16/18+人宫颈癌细胞Hela和Siha细胞活力、增殖能力，促进肿瘤细胞凋亡，同时影响细胞周期蛋白以及凋亡相关蛋白的表达；体内实验的结果同样证实了miR-1通过对G6PD的调控抑制移植瘤生长及恶性程度、病理分型，并影响了细胞周期相关蛋白以及凋亡相关蛋白的表达。本研究结果提示miR-1通过调节细胞周期相关蛋白、凋亡相关蛋白的表达而影响癌细胞/移植瘤的生长、增殖和凋亡，而此效应依赖于对G6PD的调控。本研究首次揭示并证实了G6PD作为癌基因在宫颈癌中的作用及其分子调控机制，为临床高危型（16、18型）HPV 感染的宫颈癌揭示了全新的治疗分子靶点。

内容获取失败，请点击重试