不依赖于CAR的膀胱癌特异性溶瘤腺病毒构建及基因靶向治疗研究

In order to solve the low-transinfection efficency of 5 type adenovirus for low/non-CAR bladder cancer cells,our research group will use pFex system to construct recombinant adenovirus AdTrack-FBR2 by inserting the random hexapeptide library and bladder cancer-specific oncolytic gene UPII-E1A and PSCAE-UPII-E1A into the E1 region of adenovirus. Then, we will further screen newly high affinity binding adenovirus AdTrack-FBR2-X on non-CAR expression bladder cancer cells by capsid-displayed peptides technology.The CAR of bladder cancer cells will be knocked down by △TAYT sequence. Subsequently, cells will be infected with the above adenovirus and we explore the efficency of transinfection、specificity and molecular mechanism. Finally, we will establish new gene therapy of oncolytic adenovirus for bladder cancer.We will also demonstrate the curative effect and its mechanism of new oncolytic adenovirus in combination with radiation and chemotherapy. Together with previous oncolytic adenovirus studies, we will try to treat all bladder cancer cells including CAR-postive and CAR-negative cells.We will improve the level of biological treatment of bladder cancer and provide the basis date for other cancer therapy.

针对5型腺病毒转染科萨奇腺病毒受体（CAR）低表达的膀胱癌细胞效率低和杀伤弱的问题。本课题组利用pFex系统将随机六邻体多肽文库和膀胱癌特异溶瘤基因UPII-E1A和PSCAE-UPII-E1A导入E1区获得重组腺病毒AdTrack-FBR2，然后用病毒衣壳展示肽技术筛选新的不依赖于CAR的高亲和力的膀胱癌重组腺病毒AdTrack-FBR2-X。利用 △TAYT序列敲除腺病毒CAR基因，将重组腺病毒转染CAR低表达的膀胱癌细胞，探讨其转染的有效性、特异性和分子机理，建立针对膀胱癌的新的溶瘤病毒基因治疗体系。在此基础上，阐明新型的不依赖于CAR的膀胱癌组织特异性溶瘤病毒联合放化疗治疗膀胱癌的疗效及机理，结合我们先前一系列溶瘤腺病毒研究，可以杀伤包括CAR表达阳性和阴性的膀胱肿瘤细胞，实现针对各类膀胱癌基因治疗的有效性。提高膀胱癌生物治疗的水准。为其它肿瘤治疗提供了理论依据。

针对5 型腺病毒转染科萨奇腺病毒受体（CAR）低表达的膀胱癌细胞效率低和杀伤弱的问题。本课题组利用pFex 系统通过同向Cre/loxP 位点特异性重组导入六邻体多肽.文库和膀胱癌特异溶瘤基因UPII—E1A 和PSCAE—UPII—E1A，然后用病毒衣壳展示肽技术筛选新的不依赖于CAR 的高亲和力的膀胱癌重组腺病毒AdTrack-FBR2-X。利用RNA 干扰技术和△TAYT 序列敲除细胞表面的CAR，将重组腺病毒转染CAR 低表达的膀胱癌细胞，探讨其转染的有效性、特异性和分子机理及影响因素，建立针对各种膀胱癌的新的溶瘤病毒基因治疗体系。在此基础上，阐明新型的不依赖于CAR 的膀胱癌组织特异性溶瘤病毒联合放化疗治疗膀胱癌的疗效及机理，结合我们先前一系列溶瘤腺病毒研究，可以治疗包括CAR 表达阳性和阴的膀胱肿瘤细胞，实现针对各类膀胱癌基因治疗的有效性。提高膀胱癌生物治疗的水准。为其它肿瘤治疗提供了理论依据。5 型腺病毒发挥抗膀胱癌作用。因此，本课题致力于构建一种不依赖于 CAR 的嵌合型膀胱癌特异性溶瘤腺病毒Ad5/F11p-PSCAE-UPII-E1A，该病毒可以通过膀胱癌广谱表达的 CD46 分子进入肿瘤细胞发挥溶瘤作用。顺铂是膀胱癌的治疗中较为常用的一种化疗药物，我们通过一系列体外实验研究Ad5/F11p-PSCAE-UPII-E1A 联合顺铂是否具有协同抗肿瘤作用。不依赖于 CAR的嵌合型溶瘤腺病毒的构建及其与顺铂的联合应用为膀胱癌的基因治疗提供了一个新的思路，拓展了膀胱癌治疗领域。

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