噬菌体在肠源性脓毒血症动物模型中治疗作用的研究

该项目拟选择金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、奇异变形杆菌和鲍曼不动杆菌作为致病菌，以无特异病原级ICR小鼠为感染对象，在氨苄青霉素和环磷酰胺联合诱导下，经口感染，分别建立由不同细菌引起的肠源性脓毒血症的动物模型。在此基础上，采用常规方法分离出针对不同细菌的噬菌体，经生物学特性分析、鉴定和纯化后，应用在肠源性脓毒血症的动物模型中。通过观察动物的生存率，动物血液和内脏炎症因子水平的检测和记录动物体内（血液、内脏和肠腔）的活菌数，评价噬菌体作为一种独特的抗微生物制剂在脓毒血症中的疗效。为噬菌体疗法应用在各种类型的细菌性感染提供实验依据，为解决日益凸显的由耐药性细菌引起的感染性疾病的治疗开拓新的思路。

[摘 要] 在细菌耐药性日益凸显的今天，抗生素疗法面临前所未有的挑战。而针对多重耐药细菌感染的噬菌体疗法又重新受到人们的关注。噬菌体是侵袭细菌的病毒，广泛存在于自然界。噬菌体侵入细菌细胞内，通过裂解酶的作用，破坏细胞壁，造成细菌裂解死亡。因此利用噬菌体快速杀灭致病菌从而达到治疗目的。本项工作以阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌作为致病菌，经口感染分别建立肠源性脓毒血症的动物模型，通过噬菌体疗法以期达到保护作用。为探讨解决日益凸显的由耐药性细菌引起的感染性疾病的治疗提供新的思路。. 采用双层琼脂法从环境中分离2株阴沟肠杆菌噬菌体和3株鲍曼不动杆菌噬菌体。通过对其生物学特性的分析发现：⑴ 2株阴沟肠杆菌噬菌体属于有尾病毒目（Cuadovirales）, 管尾噬菌体科（Siphoviridae）; 其基因组大小约为35 kb;.一步生长曲线的潜伏时间为5 min、 爆发时间约45 min; 最佳感染复数为10-2。2株阴沟肠杆菌噬菌体为裂解性噬菌体。⑵ 3株鲍曼不动杆菌噬菌体属于有尾病毒目（Cuadovirales），短尾噬菌体科（Podoviridae）；其基因组大小约为30 kb; 最佳感染复数为10-2; 一步生长曲线表明; 噬菌体在裂解宿主菌时，潜伏期为20 min ; 爆发期为30 min; SDS-PAGE的蛋白电泳包括12种蛋白，分子量在29～116 kDa。3株鲍曼不动杆菌噬菌体为裂解性噬菌体。. 在完成噬菌体的分离和鉴定的基础上，本项研究选择阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌作为致病菌，以无特异病原的ICR小鼠为感染对象，在氨苄青霉素和环磷酰胺的作用下，经口感染建立肠源性脓毒血症的动物模型。通过给予噬菌体治疗，评价噬菌体疗法在肠源性细菌性脓毒血症中的疗效。根据接受噬菌体治疗的不同时间，分为3个治疗组。结果发现；噬菌体治疗组（第二组）的动物，其存活率明显高于对照组（治疗组的存活率分别为50%和60%，而对照组的存活率为0%）， 血液和肝脏中反映炎症的细胞因子水平（IL-1β、IL-6和TNF-α）亦不同程度的低于对照组，血液和内脏的活菌数也明显低于对照组。动物实验结果说明；通过口服噬菌体对于由阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌引起的肠源性脓毒血症是有效的，为噬菌体疗法应用在细菌性感染，特别是由多重耐药性细菌引起的感染提供依据。

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