VASN介导的人肝癌细胞来源的功能性循环microRNA的释放及传递机制研究

In recent years, circulating microRNAs is a new field of noncoding RNA studies.Circulating microRNAs are abundantly present and surprisingly stable in multiplebiological fluids. The usefulness of circulating miRNAs as biomarkers for a wide range of tumor and cardiovascular diseases have important value. However, the function of circulating miRNAs remain largely unknown. It is also need to explore the selective release, transport and targeting mechanism of miRNAs. We will carry out intensive research of the role of VASN on release and delivery of functional circulating miRNAs from human liver cancer cells.

循环miRNA是近几年非编码研究的一个新领域，由于其在人类各种体液中具有良好的稳定性，可以作为一种新的非侵入性潜在的诊断标志物，在各种肿瘤和心血管疾病诊断中具有重要价值。然而，对于循环miRNA功能却知之甚少，对应的循环miRNA选择性释放，传递及靶向作用机制也有待深入研究。本项目拟以人肝癌细胞为源细胞，脐静脉上皮细胞为靶细胞的模型，以肝癌细胞特异表达的RNA结合蛋白VASN为例，阐释核酸结合蛋白介导的人肝癌细胞来源的功能性循环microRNA的释放及传递机制。

循环microRNA稳定存在于人体各种体液中，可以作为一种新的非侵入性潜在的诊断标志物，在各种肿瘤和心血管疾病诊断中具有重要 价值。不仅如此，其生物学功能也日益受到重视。本项目建立以人肝癌细胞为供体细胞的模型，以研究循环microRNA选择性释放、运输及靶向作用于受体细胞的分子机制，首次提出肝癌细胞高表达的VASN蛋白可能是microRNA结合蛋白。研究结果显示，可溶性VASN（sVASN）是其主要的功能形式；获得了sVASN的功能性单抗V21；利用CRISPR技术构建了VASN稳定敲除细胞株；通过Co-IP、质谱、BIAcore、ELISA等实验鉴定出可溶性VASN（sVASN）可能的受体TFR1；利用噬菌体展示技术筛选获得V21的模拟表位，并通过ELISA结合实验、ELISA竞争实验以及保守位点丙氨酸突变实验进行了验证；EMSA实验的结果显示，sVASN特异结合miR146b和miR21，将保守位点突变的突变体蛋白结合能力显著下降；sVASN可能通过与受体结合，介导miR146b和miR21进入受体细胞293T，发挥生物学功能。本项目有望为寻找鉴定新的循环microRNA载体蛋白提供新的策略，为循环microRNA生物学功能研究提供新的线索；同时也有助于探索VASN蛋白的新生物学功能。

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