EGFR磷酸化蛋白预测非小细胞肺癌EGFR-TKI治疗敏感性与耐药性研究

Lung cancer has become the first morbidity and mortality of carcinoma in our country. Being a new treatment option in the clinical choice, EGFR-TKI targeted therapy is a hot spot in the research area. However, the efficacy is closely related to the individual difference in NSCLC (non small cell lung cancer) patients. Screening the population who may be benefit from EGFR-TKI drug will significantly improve the survival. So it is crucial to find the more sensitive molecular markers in the clinical EGFR-TKI theraphy. Our previous study found that the EGFR possessed the phosphorylation from the alternative splicing by the Genome-wide Scan method. Therefore, we will first compare the sensitivity with the current study of EGFR-TKI, and then use the five cloned alternative splicing for the EGFR-TKI resistant research to determine if the EGFR phosphorylation protein is more effective and sensitivity to EGFR-TKI choice. A double-blind follow-up cohort study divided by these positive and negative markers will be performed during in the two years, and then the SCID EGFR-TKI immunodeficient mice model which was transplanted by lung cancer tissue will be used to verify the sensitivity and resistance of EGFR-TKI drug. All the results will help to provide a new idea for the drug prediction and resistance surveillance of the EGFR-TKI clinical treatment.

肺癌已成为我国发病率及死亡率排名第一位的恶性肿瘤，EGFR-TKI靶向治疗成为目前新的治疗选择热点，但其疗效与患者个体化差异密切相关；筛选可能受益人群将会显著改善此类患者的生存，因此探索更加敏感或有补充作用的分子标志物用来指导临床EGFR-TKI用药尤为迫切。我们通过前期完成的非小细胞肺癌全基因组扫描及其他相关研究，发现了EGFR的可变剪接和由此造成的EGFR自身磷酸化，据此我们将在比较现有EGFR-TKI药物敏感性研究基础上，利用克隆的5个可变剪接进行EGFR-TKI耐药等研究，探索EGFR磷酸化蛋白是否更有效地可用于EGFR-TKI药物敏感性和耐药性的判定；同时构建这些标志物阳性和阴性的随访研究队列，开展为期2年的双盲病例随访研究，并进一步利用SCID免疫缺陷鼠移植瘤模型进行EGFR-TKI药物敏感性和耐药性的验证，以期为临床治疗中EGFR-TKI疗效预测与耐药监测提供一个新的思路。

肺癌已成为我国发病率及死亡率排名第一位的恶性肿瘤，其中非小细胞肺癌约占所有肺癌的80%。以手术、放疗、化疗和分子靶向治疗为主的综合治疗是肺癌最主要的治疗手段。其中，EGFR-TKIs是目前针对EGFR治疗NSCLC的重要分子靶向药物，尤其适用于有EGFR突变的患者。EGFR TKI的结构域由外显子18-24编码，其中外显子18-21是最常见的基因突变为点，也是TKI与EGFR-Tk的结合部位。大约90%的EGFR 基因突变集中于19或21 外显子中，其中19 外显子的缺失突变及21 外显子中的点突变的患者服用EGFR-TKI 的有效率均可达到70%以上。真核生物中, 绝大多数基因的初始转录产物前mRNA( premRNA) 必须经过剪接等加工过程, 才能形成成熟的mRNA。在人类癌症进程中, 广泛存在着各种形式的剪接变异体, 许多癌症相关基因受剪接过程的调控。异常剪接、剪接过程改变, 甚至某一特定可变剪接的转换,都可能在肿瘤发生、发展的任一阶段起到主要作用。课题组对EGFR TKI的作用进行了深入研究：①我们采用SMaRT技术完成EGFR剪接变异体的构建，并证实重组基因正确，剪接变异体构建成功，②进一步对其进行研究，结果发现100mg/L的黄芪甲苷与750mg/L的EGFR TKI联合应用对A549细胞有显著抑制增殖的作用。③为检测EGFR TKI (100 mg/L)与对照组A549细胞MMP-2和MMP-9在mRNA水平表达的表达差异。结果显示，EGFR TKIA549细胞MMP-2和MMP-9的表达明显低于对照组，差异有统计学意义。④细胞电阻抗传感技术是一种能够对贴壁生长细胞的状态、位置、形态等方面进行实时监测的先进技术方法。EGFR TKI组(100 mg/L)与对照组A549细胞相比较，黄芪甲苷能够显著增强A549细胞的黏附能力并抑制其转移。⑤中药单体黄芪多糖与化疗药物5-氟尿嘧啶和靶向药物西妥昔单抗分别单独及联合应用，通过流式细胞术观察其对三种细胞系RKO、HT-29及DIFI凋亡的影响，结果显示，与对照组相比，黄芪多糖和5-氟尿嘧啶分别可以增强RKO、HT-29及DIFI细胞的凋亡率(P<0.05)，而西妥昔单抗组细胞凋亡率与对照组相比较，无显著差异。

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