基于心肌保护及能量代谢相关通路的参附汤及入血成分治疗亡阳证的机制研究

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
81274036
项目类别：
面上项目
资助金额：
70.0万
负责人：
李丽静
依托单位：
长春中医药大学
学科分类：
H3203.中药药效物质
结题年份：
2016
批准年份：
2012
项目状态：
已结题
起止时间：
2013-01-01 至2016-12-31

项目参与者：
王楚盈；刘佳；李秋明；王艳萍；李玉梅；张志仁；刘少丽；张淞；吴世家；
关键词：
心肌保护通路中药复方配伍能量代谢通路药效物质基础参附汤

项目摘要

The research importances of Chinese compound pharmacology are basic materials study,mechanism study and the regulation stud y. This subject is based on the former research,which studied the blood materials of the classical fomula-Shenfu decoction by serum pharmacochemistry.There are six effect materials, ginsenoside Rg1,ginsenoside Rb1,ginsenoside Re,ginsenoside Rg2, aconitine .And the results proved that the Shenfu decoction can improve the energy metabolism and protect the cardiac muscles of model rats and dogs which attract Yang depletion syndrome. Basing on all of above,search the basic materials,compare the variation of the blood compounds ,efficacy ,the regulation of efficiency attenuated and the four pathways.The pathways are ghrelin pat,CaN-NFAT3, mTOR Beclin-1 and PI3-K/AKT.Try to show the compound and material ,to find the regulation and the new the effective compound the topics to study the new method and way.

传统中药复方药理作用的物质基础、作用机制及配伍规律是现代研究的重点，本课题在前期血清药物化学方法初步证实经典名方《参附汤》给药后入血效成分有人参皂苷Rg1、Rb1、Re、Rg2、乌头碱、乌头次碱等成分及7个待鉴定成分，初步证实参附汤具有改善亡阳证大鼠和犬心肌能量代谢、保护心肌作用的基础上，进一步对各入血成分进行鉴定和药效学筛选，寻找《参附汤》治疗亡阳证的药效物质基础、比较人参和附子配伍前后入血成分和药效作用的变化，探讨其增效减毒的配伍规律，通过上述成分对亡阳证动物模型心肌的保护和能量代谢优化相关通路ghrelin通路、CaN-NFAT3信号转导通路、自噬调控通路mTOR Beclin-1、凋亡通路及PI3-K/AKT 的影响及通路间相互关系，寻找参附汤治疗亡阳证的有效成分并探讨其作用机制，进而明确《参附汤》配伍规律，为研究中药复方药效物质基础及作用机制提供新方法新途径。

结项摘要

参附汤是治疗亡阳证的著名经典方剂，但是其化学成分及作用机制尚不明确。采用液－质联用技术测得参附汤入血成分人参皂苷Rg1、Re、Rf、20(S)-Rh1、20(S)-Rg2、20(R)-Rg2、20(R)-Rh1、Rb1、Rc、Rb2、Rd 和Rg3及血中成分相对比例。完善并建立符合中医证候特点的心肾阳虚型心衰模型，采用异丙肾上腺素、阿霉素、心肾阳虚型三种大鼠CHF模型，观察参附汤及其入血成分和测得皂苷成分群对大鼠自然情况、血流动力学、血清BNP、病理、线粒体、自噬小体、凋亡细胞、细胞形态等作用。从能量代谢、凋亡、自噬等方面探索参附汤治疗亡阳证机制。观察参附汤及入血有效成分对模型大鼠心肌细胞Caspase-3、LC3、心肌细胞Ca2+、CaN和NATc3蛋白表达影响，证实其通过抑制Ca2+/ CaN-NFATc3信号转导通路发挥作用，保护ADR损伤心肌细胞可能与PI3K/Akt通路有关。用四种细胞损伤模型考察参附汤及其血中移行成分可提高AngⅡ损伤、缺氧/复氧损伤心肌细胞的存活率、减轻细胞膜破坏，减少LDH漏出量、保护心肌细胞与膜完整性，降低心肌细胞凋亡和自噬；降低缺氧复氧致Beclin1 mRNA表达、其机制与抑制凋亡自噬有关；提高H2O2损伤心肌细胞存活率、自主搏动频率；改善H2O2损伤心肌细胞导致的Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性降低，对MDA、LDH、SOD、胞内游离钙活性均有调整作用，动态比较参附汤给药后作用发现SFP5min、SFY5%对心肌细胞存活率作用最优；减少LDH漏出保护细胞膜、维持心肌细胞完整性，降低Caspase-3、Beclin1mRNA、Atg5mRNA过度表达，可能与抑制损伤心肌细胞凋亡和自噬有关；降低ADR与LY协同引起的Beclin1 mRNA、Atg5mRNA的表达。SFP5min对心肌细胞膜保护作用优于SFP10min，SFY2%对心肌细胞膜保护作用优于SFY5%。参附汤及入血有效成分可能通过改善血流动力学及一般状况、保护心肌细胞、保护细胞膜的完整性，降低钙超载，抑制脂质过氧化等改善心肌细胞的损伤、纤维化和肥大、调整心肌细胞的凋亡、自噬、能量代谢有关，可能的作用于PI3K/Akt、Ca2+/ CaN-NFATc3、mTOR Beclin1等通路发挥其作用。研究获得入血有效成分、探讨了心肌保护的机制、建立了证候模型。