基于代谢网络调控和肠吸收的柴胡疏肝散组方配伍研究

本课题在已完成的国家自然科学基金项目（No.30772711）基础上，拟采用LC-MS/MS代谢组学和肠吸收动力学方法，研究柴胡疏肝散组方配伍特征和药效成分的贡献。首先利用代谢组学分析手段灵敏，可反映机体内源性代谢网络在药物干预后发生的细微变化，考察复方和减药味方对抑郁模型大鼠代谢网络调控的差异，获得所减去单味药及其成分对复方抗抑郁的贡献和作用通路的影响；然后采用Caco-2细胞和肠外翻囊模型等研究方法，通过考察柴胡疏肝散的主要有效成分在不同配伍组方中的肠吸收动力学，研究单味药对复方有效成分吸收的影响。综合代谢组学和肠吸收研究结果，有望从代谢网络调控和肠吸收角度阐明柴胡疏肝散的君、臣、佐、使的配伍原理及科学内涵，建立符合中医药理论和中药复杂体系的科学研究方法和思路，为研制开发多靶点治疗抑郁症的创新中药打下坚实基础，对推动我国具有自主知识产权创新药研制和中药现代化具有积极而非常重要的意义。

本课题应用代谢组学，研究了柴胡疏肝散全方水煎剂及其减味方对慢性不可预见性应激诱导的大鼠抑郁模型（CUMS）大鼠代谢紊乱的调控作用，同时应用在体肠灌流和体外肠外翻模型，考察了全方和减味方主要活性成分的肠吸收，从代谢网络调控、行为学评价、蛋白表达水平、肠吸收等方面探讨了柴胡疏肝散的配伍规律，从整体动物和分子水平阐明了各单味药对复方抗抑郁作用的贡献和作用途径。本课题首次将代谢组学和肠吸收研究联合应用于中药复方配伍规律研究中，为诠释中药复方药效物质基础研究和配伍科学内涵提供了新的思路和方法。.行为学评价研究表明，柴胡、香附和甘草对全方改善大鼠体重增长贡献作用较大；柴胡、川芎和甘草对全方提高自主活动能力贡献较大；白芍对全方提高糖水偏嗜度贡献较大；柴胡和甘草对全方提高大鼠免疫功能具有较大贡献。. 应用基于NMR和LC-MS/MS技术的代谢组学研究了各减味方对CUMS大鼠血浆、尿液和海马组织代谢紊乱的调控作用，并与全方的调控作用进行了比较，从而获得所减去单味药及其成分对复方抗抑郁的贡献和作用的代谢通路。结果表明，全方中7味单味药分别或共同调控了CUMS诱导的丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢、甘油磷脂代谢、牛磺酸和亚牛磺酸代谢紊乱、酮体的合成和降解、烟酸和烟酰胺代谢紊、磷酸肌醇代谢等紊乱，相互协同而发挥抗抑郁作用。. 应用蛋白免疫印迹法研究了全方及各减味方对CUMS大鼠海马组织中与抑郁发生相关蛋白ERK1/2、pERK1/2、BDNF、CREB和5-HT1AR蛋白表达的影响。结果表明，各单味药通过不同程度地协同改善慢性应激中神经营养因子BDNF和相关MEK-ERK-CREB的信号转导通路，以及神经递质5-羟色胺合成而发挥抗抑郁作用。. 采用大鼠在体肠灌流和肠外翻模型，考察了柴胡疏肝散的主要有效成分在不同配伍方中的肠吸收动力学。结果表明，全方中主要成分在肠道吸收主要集中在十二指肠和空肠。全方中阿魏酸在整个肠道吸收良好，而其他成分吸收较差。与全方比较。各减味方中芸香柚皮苷、柚皮苷、新橙皮苷和甘草酸的吸收均有所降低。其中，减甘草方中除阿魏酸吸收较全方增大外，其他成分均显著降低，表明配伍后可增大有效成分吸收，如甘草可促进其他成分的肠吸收，体现了方剂配伍的合理性。. 课题按计划完成了研究任务和考核指标，已发表学术论文6篇，其中SCI收载5篇；培养研究生4名。

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