ELL2下调通过NF-κB/CXCL10轴介导肿瘤相关巨噬细胞浸润促进前列腺癌转移的机制研究

The metastasis of prostate cancer is the major factor leading to poor prognosis for the patients, but the mechanism remains to be clearly defined. Present studies have convincingly demonstrated that local inflammatory microenvironment is closely correlated to metastatic disease. We have previously verified that downregulation of ELL2 promotes prostate cancer metastasis, upregulates the expression of chemokine CXCL10 and enhances the recruitment of tumor-associated macrophage (TAM). While the recruitment of TAM is significantly weakened by inhibition of CXCL10. Moreover, knockdown of ELL2 upregulates the expression of phosphorylated NF-κB(p65). Thus, we hypothesized that downregulation of ELL2 activates NF-κB signaling pathway, resulting in recruitment and infiltration of TAM via enhanced secretion of CXCL10 in tumor cells, and hence tumor metastasis. In this study project, we aim to elucidate our hypothesis at three levels as follows, cellular, in vivo and clinical samples. This research will reveal the mechanism that downregulation of ELL2 promotes prostate cancer metastasis from the tumor inflammatory microenvironment perspective and provide new thoughts for prostate cancer therapy.

前列腺癌转移是导致患者预后不良的主要因素，但转移的机制尚不完全明确。研究证实肿瘤的转移与局部炎症微环境密切相关。我们前期研究显示：ELL2下调可促进前列腺癌转移，上调趋化因子CXCL10的表达及增强肿瘤相关巨噬细胞(TAM)的募集，而抑制CXCL10表达后TAM的募集明显减弱。此外，前列腺癌细胞中，下调ELL2表达后磷酸化的NF-κB(p65)表达升高。为此，我们提出假设：ELL2下调通过激活NF-κB信号通路，诱导肿瘤细胞分泌趋化因子CXCL10，招募肿瘤相关巨噬细胞浸润，促进前列腺癌转移。为验证这一假说，本项目拟从体外实验、动物模型和临床标本三个层面予以证实，进而从肿瘤炎症微环境的角度揭示ELL2下调促进前列腺癌转移的分子机制，为前列腺癌的治疗提供新的思路。

前期研究证明了ELL2下调会影响前列腺癌的侵袭、转移，但机制不明确。我们进行了如下研究：1.收集临床前列腺癌标本，制作组织芯片并进行免疫组化染色，研究和分析ELL2表达与Gleason评分、淋巴结转移、包膜侵犯、神经侵犯、脉管侵犯等之间的相关性。2.在前列腺癌细胞中，通过siRNA下调ELL2表达，Transwell和划痕实验检测ELL2表达变化对前列腺癌细胞侵袭、迁移的影响。3.对测序结果进行分析寻找ELL2调控的下游信号通路。通过Western blot方法检测ELL2表达下调后可能调控的信号通路相关蛋白的表达，进一步探索ELL2影响前列腺癌细胞侵袭、迁移的机制。4.在AR阴性前列腺癌细胞PC-3中，下调ELL2表达后，并加入JNK激动剂，挽救性表达磷酸化JNK（P-JNK），检测前列腺癌细胞侵袭、迁移的变化。在AR阳性前列腺癌细胞LNCaP中，下调ELL2表达后，并加入JNK抑制剂抑制P-JNK表达，检测前列腺癌细胞侵袭、迁移的变化。Western blot方法检测JNK、P-JNK、N-Cadherin的表达。结果显示，AR阳性前列腺癌组织中ELL2表达低的患者更容易出现转移和进展。在AR阳性与AR阴性前列腺癌细胞中，ELL2对细胞侵袭、迁移的作用是相反的。ELL2下调抑制AR阴性细胞的侵袭和转移；相反，在AR阳性细胞中，ELL2下调促进了细胞的侵袭和转移。在后续的进一步研究中，ELL2下调调控了MAPK通路和磷酸化JNK、N-Cadherin的表达，并进一步阐明了ELL2通过调控MAPK-JNK-EMT影响前列腺癌侵袭和转移的机制，为前列腺癌的诊治提供了理论基础。

内容获取失败，请点击重试