基于外泌体microRNA探讨清热活血方药调控类风湿关节炎骨平衡机制

Rheumatoid arthritis (RA) is a high degree of bone destruction that can lead to focal, articular and systemic bone loss. Heat,dampness, and blood stasis are important factors to the bone destruction of active RA. Previous clinical research confirmed Qingrehuoxue Decoction could delay RA bonedestruction, and two preliminary National Natural Science Foundation researchs showed that it could regulate OPG/RANKL/RANK pathway and Dkk/Wnt pathway, respectively in osteoclasts and osteoblasts, and then correct into osteoclast and osteoblast imbalance. "Osteo- immunology " consider that the imbalance of osteoclast and osteoblast is core mechanism of RA bone destruction, and recent studies have found that exosomes play an important role in bone metabolism. The mechanism of Qingrehuoxue Decoction to protect the bone is a multi- target effect, which may directly regulate the dynamic balance of osteoblasts and osteoclasts through the exocrine pathway, and then correct the imbalance of the function of osteoblasts and osteoclasts. In this study, the osteoblasts (OB) and osteoclast (OC) trained technologies, based on exosomes , from mRNA, genes, protein levels, multi-level explore the effect of Qingrehuoxue Decoction on bone resorption and bone formation in RA, and to explain the role of the further interpretation of the "protect bone" theory the scientific connotation.

类风湿关节炎(RA)是一个高度的骨破坏过程，可导致局灶性、关节旁和系统性骨丢失。湿热瘀是活动期RA骨破坏重要因素,临床研究证实清热活血方药具有延缓RA骨破坏的作用，前期两项国家自然基金研究表明,清热活血方药通过调节OPG/RANKL/RANK通路和Dkk/Wnt信号通路，分别作用于破骨细胞和成骨细胞,进而纠正成骨、破骨细胞失衡。"骨免疫"学说认为成骨、破骨细胞平衡被打破是RA骨破坏核心机制,近期研究发现外泌体在骨代谢平衡中具有重要作用。清热活血方药“护骨”机制为多靶点起效，可能通过外泌体途径直接调节成骨细胞和破骨细胞的动态平衡，进而纠正成骨、破骨细胞间功能失衡状态。本研究采用成骨细胞（OB）和破骨细胞（OC）共培养技术，立足于外泌体microRNA，从基因、mRNA、蛋白水平多层次探讨清热活血方药在RA骨吸收和骨形成骨平衡中所起的作用,进一步诠释其"护骨"理论的科学内涵。

类风湿关节炎(RA)是一个高度的骨破坏过程，可导致局灶性、关节旁和系统性骨丢失。基于前期临床与基础研究，清热活血方可以明显改善RA患者关节肿胀、晨僵、滑膜炎症反应等，并可延缓甚至阻断RA骨破坏的进展。清热活血方通过调节OPG/RANKL/RANK通路和Dkk/Wnt信号通路，分别作用于破骨细胞和成骨细胞，进而纠正成骨、破骨细胞失衡，从而起到“护骨”的作用。.本研究立足于外泌体microRNA，从三个方面进行研究，（1）类风湿关节炎患者血清外泌体miRNA表达谱研究；（2）清热活血方对CIA大鼠外泌体miRNA干预作用研究；（3）清热活血方通过miR-214调控成破骨细胞平衡防止RA骨破坏。研究结果显示，在湿热瘀阻证RA骨破坏的患者血清外泌体miRNA中，hsa-miR-214-3p显著升高，hsa-miR-193b-3p、hsa-miR-376a-3p、hsa-miR-30a-5p、hsa-miR-140-3p显著降低，其参与了RA骨破坏的病理过程，是具有潜在应用价值的RA骨破坏的生物标志物。MAPK信号通路是RA疾病过程中重要的转导通路，蛋白质磷酸化、细胞自噬、转移酶活性、细胞内信号转导、线粒体等功能异常可能是RA骨破坏的重要发生机制。体内实验表明，miR-214-3p和miR-30a-5p可能是RA发病中的起始部分或中心节点，清热活血方可能通过miR-214-3p-ATF4、miR-30a-5p-ADAM19等调控轴干预CIA模型发生的病理过程。体外研究表明，清热活血方可以通过抑制miR-214的表达，调控OPG/RANKL/RANK、Dkk/Wnt信号通路促进成骨细胞的分化，抑制破骨细胞的分化，从而干预RA骨破坏，也说明miR-214在RA骨破坏中起到重要的作用，是治疗的潜在靶点。.本研究从“临床-动物-细胞”多维度，从基因、蛋白水平多层次探讨清热活血方药在RA骨吸收和骨形成骨平衡中所起的作用，可为中药复方多通路、多靶点治疗疾病提供可靠的分子生物学依据，也阐明中药复方具有抗骨吸收和促骨合成的双重功效，进一步诠释其"护骨"理论的科学内涵，具有临床应用前景和重要的科学意义。

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