外周血单核细胞MDL-1水平对初发性稳定型心绞痛不良心脑血管事件的预测价值与其表达调控的机制探讨

Primary stable angina pectoris is the early phenotype of coronary artery disease (CAD). Previous traditional risk factors have limited value in early diagnosis of CAD and predicting major adverse cardiovascular events (MACE). However, correlation between myeloid DAP-12 associated lectin-1 (MDL-1) expression and prognosis of CAD as well as its potential expression-regulating mechanism remain unknown. Our previous study found peripheral blood monocyte (PBMC) MDL-1 expression is significantly increased in stable angina pectoris patients compared with control group. Atherosclerosis progression agents ox-LDL/hypoxia can induce MDL-1 expression, which could be blocked by hypoxia induced factor-1α (HIF-1α) inhibitor. According to our previous research, we hypothesized that human PBMC MDL-1 expression correlate to the presence of stable angina pectoris and might predict the prognosis of CAD. Moreover, HIF-1α may play a pivotal role in regulating MDL-1 expression in an proatherosclerotic context. Our study will test MDL-1 expression by qPCR, Western-blot and flow-cytometry and confirm the regulating role of HIF-1α by adenovirus infection and constructing Mac-hif1α-/- LDLr-/- mouse model. This project aims to provide novel biomarker for early risk assessment of CAD.

初发性稳定型心绞痛是冠心病的早期表型，既往传统危险因素对早期诊断该病和预测不良心脑血管事件价值有限。MDL-1受体水平与稳定型心绞痛的预后和其表达调控机制不明确。前期研究发现稳定型心绞痛患者外周血单核细胞MDL-1水平显著高于正常健康受试者，加入动脉粥样硬化进展介质能诱导小鼠腹腔巨噬细胞MDL-1表达，该表达能被HIF-1α抑制剂阻滞。结合以上研究，我们提出人外周血单核细胞MDL-1水平与初发性稳定型心绞痛发生相关并对未来不良心脑血管事件具有一定的预测价值，此外，HIF-1α可能是动脉粥样硬化进展环境调控MDL-1表达的重要分子机制。本课题拟使用荧光定量PCR、Western-blot和流式细胞术对单核细胞MDL-1水平进行检测，采用腺病毒感染、建立巨噬细胞特异性HIF-1α敲除的LDLr-/-小鼠证实HIF-1α在MDL-1表达调控中的作用，旨在为早期冠心病风险分层提供新的生物学标志物。

氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）和缺氧环境是造成早期动脉粥样硬化斑块形成和进展的重要介导因子，促进内皮功能不全和氧化应激，并且导致斑块内巨噬细胞向促炎症表型进行转变。我们的前期研究发现，加入动脉粥样硬化进展介质（ox-LDL和缺氧）能诱导小鼠腹腔巨噬细胞髓系DAP-12 相关凝集素-1（MDL-1）表达，该表达能被缺氧诱导因子（HIF-1α）抑制剂所阻滞。然而，HIF-1α表达上调是否介导了ox-LDL和缺氧环境诱导的MDL-1分子表达和转录并不明确。我们进一步的研究构建了HIF-1α过表达腺病毒并通过感染小鼠腹腔单核巨噬细胞建立巨噬细胞过表达HIF-1α模型，另外，我们将包含MDL-1启动子区域的荧光素酶报告基因质粒转染入HEK293T细胞，将上述细胞分组行ox-LDL/缺氧环境刺激并检测细胞中MDL-1的表达水平及荧光素酶活性。实验发现，在早期动脉粥样硬化介质（50ug/mL的ox-LDL和1% O2）刺激之下，感染了过表达HIF-1α腺病毒的巨噬细胞中MDL-1的表达水平相较于感染空载病毒的巨噬细胞显著升高。除此之外，我们还发现，在50ug/mL ox-LDL刺激下，MDL-1启动子的转录活性较PBS组显著增强，并且该现象能被预先加入的HIF-1α抑制剂所阻滞。然而，无论有无早期动脉粥样硬化介质干预，当我们事先加入HIF-1α抑制剂刺激后，与对照组相比，MDL-1启动子的转录活性均显著下调。以上研究结果表明HIF-1α是参与MDL-1受体表达及转录调控的关键分子。我们的研究结果首次证明HIF-1α分子在动脉粥样硬化斑块进展环境因素（ox-LDL和缺氧）调控MDL-1 受体表达过程中起关键性的作用，为未来早期诊断慢性稳定型心绞痛的发生和预防冠心病不良心脑血管事件提供新的生物学标志物和治疗靶点。

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