Nrf2信号与NF-κB信号交互作用调控妇科虚寒证氧化应激损伤及金匮温经汤干预的机制

结题报告

项目介绍

AI项目解读

基本信息

批准号：
81503451
项目类别：
青年科学基金项目
资助金额：
18.0万
负责人：
徐丁洁
依托单位：
华北理工大学
学科分类：
H3302.中西医结合临床基础
结题年份：
2018
批准年份：
2015
项目状态：
已结题
起止时间：
2016-01-01 至2018-12-31

项目参与者：
徐洪；齐峰；曹颖；柳月娟；江晓玲；方跃坤；朱宏印；
关键词：
信号通路氧化应激金匮温经汤妇科虚寒证

项目摘要

Gynecological asthenia-cold syndrome is the more prevalent disease in clinical. In the previous study, We demostrated that energy metabolism disorder, NEI abnormality and oxidative stress are composed to main pathological basis of Gynecological asthenia-cold syndrome. And oxidative stress could be a specific marker of Gynecological asthenia-cold syndrome. Nrf2/HO-1 signal is known to orchestrate antioxidant and detioxidant response to NF-κB signal in oxidative stress. Therefore, this study proposes to use asthenia-cold rat model combined with cell oxidative stress model induced by cold, to explore 1) the relationship of apoptosis and endocrine disorder in ovarian granulosa cell with oxidative stress; 2) the anti-oxidative mechanism of the Jingui Wenjing Decoction in anti-apotosis and promoting endocrine homeostasis by regulating Nrf2 and NF-κB signal. This study provides a new way and some valuable information for exploring the Syndrome resolution of “Gynecological asthenia-cold syndrome” and the principle of “Different disease with the same treatment” in Jingui Wenjing Decoction.

妇科虚寒证是临床常见的病证之一，项目申请人前期研究发现能量代谢障碍、神经-内分泌-免疫网络紊乱和氧化应激损伤构成了妇科虚寒证的主要病理学基础，其中氧化应激损伤是妇科虚寒证较为特异的指标之一。抗氧化应激体系Nrf2信号和促凋亡的NF-κB信号在氧化应激损伤中发挥了正-反两方面的调控作用。因此本研究通过构建大鼠虚寒证模型及寒冷刺激细胞模型，靶向于卵巢颗粒细胞，探讨：1）氧化应激损伤与妇科虚寒证卵巢颗粒细胞凋亡和内分泌功能紊乱之间的关联；2）金匮温经汤能够通过上调Nrf2信号/抑制NF-κB信号，拮抗凋亡和促进内分泌调节平衡，发挥抗氧化应激效应以治疗妇科虚寒证。这一研究为解析妇科虚寒证证候学本质，丰富“异病同治”的理论提供了新的思路和实验依据。

结项摘要

妇科虚寒证是由于机体阳气不足，虚寒内生，冲任失养而致经、带、胎、产、杂诸疾。流调学显示，虚寒证在人群中的患病率为9.95%。妇科虚寒证是临床较为多见的病证之一，而寒邪是其常见病因。本课题从动物实验、细胞培养以及临床研究三个方面，从整体、靶器官和分子机制三个水平上，探讨氧化应激损伤调控妇科虚寒证及金匮温经汤干预的机制。动物实验采用延长冰箱冷冻加冰水浸泡时间的方法构建妇科虚寒证大鼠模型。模型组生殖内分泌激素（E2、P、LH、FSH）及免疫功能下降（cGMP升高，cAMP／cGMP比值、CORT及IL-2含量降低）；出现氧化应激损伤（ROS、MDA含量增高，而SOD、CAT和GSH-Px含量均明显下降）。HE及电镜发现子宫、卵巢受损并伴有凋亡信号的活化（Bax蛋白表达上调，而Bcl-2蛋白表达下调）、炎症指标上调（CD68、MCP-1阳性细胞百分比升高）、微血管密度下降，以及出现氧化应激损伤（GRP78、Nrf-2蛋白表达下降）、E2合成关键酶（stAR、FSHR）表达水平下调。提示虚寒证大鼠模型存在子宫、卵巢的氧化应激损伤，继而导致细胞凋亡和内分泌功能障碍，与Nrf2信号失衡有关。而予以金匮温经汤能够显著抑制该变化。细胞培养显示，寒冷刺激能够显著诱导原代颗粒细胞的凋亡，同时伴有NF-κB、cleaved caspase-3蛋白的表达水平，而Nrf2、HO-1蛋白水平表达明显下调。培养基中E2、P含量明显下降，细胞代谢活力明显下降。而予以吴茱萸碱预处理，能够显著抑制寒冷刺激介导的氧化应激损伤。临床研究表明，对虚寒组患者，金匮温经汤治疗有效率为90%，治疗后虚寒组患者血清E2升高，血清SOD活力、GSH-PX和T-AOC均不同程度升高，MDA水平下降；同时伴有炎症指标（IL-6、MCP-1和HMGB1）的下降；子宫动脉血流PI、RI、A/B下降。说明金匮温经汤可以通过抑制氧化应激损伤，改善子宫的血液循环，调节盆腔微环境，从而治疗虚寒证月经病。以上研究结果为中医证候科学化和量化提供基础，完善了金匮温经汤的作用机制。