PDZK1调控肝脏HDL受体SRB1影响胆固醇结石病发生的机制研究

胆汁胆固醇过饱和是胆石病发生的必要条件。HDL受体SRB1多在肝细胞基底膜表达，能促进血浆中HDL的摄取并调节胆汁胆固醇的含量。我们的前期研究显示胆石病人肝脏SRB1表达增加，但其原因及其导致胆汁胆固醇过饱和的机制未明。新近发现，SRB1在肝细胞胆小管侧膜的表达协同参与了对胆汁胆固醇的分泌，这可能是胆石病发生的另一机制。另外，SRB1的表达受到PDZK1的调控。本课题将检测SRB1蛋白在胆石病人肝细胞基底膜和胆小管侧膜的分布及表达量的差异，分析其与PDZK1的关系。然后，在细胞水平和小鼠胆石模型，采用腺病毒包被技术上调及RNA干扰或化合物处理下调PDZK1表达，从正反两方面研究上述处理对SRB1表达和HDL摄取的调节作用，以及对小鼠成石的促进和预防作用，进而提出"PDZK1→SRB1→胆汁胆固醇过饱和→胆石病"的发病途径。以PDZK1为干预靶点，调控SRB1表达，可能是胆石病防治的新方法。

本课题主要的研究如下：（1）采用PDZK1过表达慢病毒载体，使HepG2细胞过表达PDZK1，能提高细胞对HDL胆固醇摄取能力；相反，采用特异性SiPDZK1干扰其表达，则降低对HDL胆固醇的摄取率。（2）成石饲料增加小鼠肝脏胆小管侧膜胆固醇转运蛋白Abcg5/g8表达，不改变基底膜侧胆固醇转运蛋白Abca1的表达。抑制Pdzk1 的表达，进而降低Srb1 mRNA和蛋白表达。FF能略微上调Pdzk1以及SRB1蛋白的表达，但对Srb1 mRNA表达的上调作用不显著。成石饲料降低近段小肠胆固醇转运蛋白Abcg5/g8以及Abca1的表达，FF则能上调其表达。成石饲料不影响Acat2的表达，但FF能上调其表达。（3）在人体肝脏SRB1和PDZK1的表达具有很强的正相关性，r=0.326, P<0.01。该结果与PDZK1在肝细胞具有调节SRB1表达的作用一致。但是，胆石组和对照组之间的比较没有显著差异。（4）肝脏TGIF的mRNA表达具有显著的性别差异，女性显著高于男性。小鼠肝脏，TGIF的表达也有类似性别差异。将TGIF质粒和人ACAT2启动子共转染肝细胞HuH7，可以检测到明显的抑制作用。而TGIF对NCP1L1启动子则起到正向调节作用。（5）将PDZK1过表达的慢病毒载体经腹腔注射成石饲料喂养小鼠4周，肝脏PDZK1表达增加，SRB1在总蛋白的表达未改变，但膜蛋白中SRB1表达增加。肝脏组织中与胆固醇代谢的相关基因中，LDLR、 ABCG5和G8上调，对ABCA1、SCP2、ACAT2和ABCB11的影响不大。（6）将SiPDZK1腺病毒载体经腹腔注射成石饲料喂养的小鼠，肝脏PDZK1蛋白的表达降低。肝脏胆固醇代谢相关的基因中ABCA1、SCP2、ABCG5、ABCG8分别上调，而ACAT2和LDLR的表达无差异。干扰组小鼠胆汁胆固醇饱和指数低于对照组。

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