口腔黏膜白斑癌变lncRNA表达谱的构建及其对PDPN过表达的调控

Oral leukoplakia (OLK) is one of the most important source of oral cancer. Molecular markers of early diagnosis and treatment for malignant transformation of OLK are urgently needed. Currently, podoplanin (PDPN) is the most influential markers. Our previous work showed that PDPN abnormally high expression in progressive oral erythroplakia and lichen planus, further supporting PDPN may be the marker, but regulatory mechanism is unclear. Long non-coding RNA (lncRNA) is the important regulatory molecules of cancer development. However the research on with transformation of OLK related lncRNA and PDPN still is blank. Based on previous work, the aim of the project is to utilize the specimens collected from patients with OLK transformation in the follow-up, identity the lncRNA expression profile of OLK transformation and the target lncRNA of regulation PDPNover cell function, verify that the target lncRNA influences the PDPNover cell colony formation, cell proliferation, cycle, differentiation, apoptosis. Through the project, we canclarify OLK transformation related lncRNA expression and lncRNA of regulation PDPN over expression, and provide lncRNA new target for PDPNover targeted therapy.

口腔黏膜白斑是口腔癌最重要的来源之一，白斑癌变的早期诊断和治疗的分子标志物亟待研究。Podoplanin (PDPN)是目前研究最具影响的白斑癌变标志物；申请人在前期工作中发现PDPN在口腔红斑和扁平苔藓癌变组织中呈异常高表达，提示PDPN可能是癌变标志物，但其调控机制尚不明了。长链非编码RNA (lncRNA)是癌发生重要的调控分子，但与癌变相关lncRNA及其与PDPN相关的研究尚属空白。本项目利用癌变患者在随访中所采集的标本，构建白斑癌变进程中相关lncRNA的表达谱；鉴定能调控PDPNover细胞功能的目标lncRNA，验证目标lncRNA对PDPNover白斑细胞克隆形成、细胞增殖、周期、分化、凋亡等细胞功能的影响。通过本项目的研究，可明确白斑癌变相关lncRNA表达谱及其能调控PDPN过表达的lncRNA，并为PDPNover靶向治疗提供lncRNA新靶点。

背景：文献表明DNA异倍体是口腔白斑癌变风险的重要预测指标， PDPN是目前最具影响的白斑癌变蛋白标志物， lncRNA是癌发生重要的调控分子，但是与癌变相关lncRNA及其与PDPN相关的研究尚缺乏。.研究内容：首先，课题组应用脱落细胞学和分析仪检测65例白斑患者的DNA倍体型，并分析其与临床病理特征、细胞学改变之间的关系，评价该技术应用于白斑癌变风险的价值。第二，高通量的全转录本芯片研究，入组患者设置为正常舌黏膜组 (n=3)、DNA整倍体伴有低度异常增生舌白斑低风险组(n=4)、DNA异倍体伴有高度异常增生舌白斑高风险组(n=4)、舌鳞癌组(n=6)，构建白斑癌变的lncRNA-mRNA调控网络表达谱及PDPN相关的lncRNA分析。最后，检测PDPN在52例DLE患者组织中免疫表达，包括44例未癌变和8例癌变患者，评价其作为DLE癌变风险的标记物的价值。.结果及关键数据：第一，脱落细胞学DNA倍体分析显示41.5%（27/65例）的白斑患者检测出DNA倍体异常，舌部和高度异常增生患者的DNA倍体比其他部位的白斑和低度异常增生患者的异常率显著更高（P<0.05），DNA异倍体伴有高度异常增生舌白斑具有高癌变风险。第二，全转录本芯片研究显示正常舌粘膜发展到低风险白斑有2554个差异转录本，低风险白斑发展到高风险白斑有1323个差异转录本，其中包括PDPN上调；高风险白斑发展到早期鳞癌有1518个差异转录本，除去正常黏膜和低风险白斑组的重复基因，属于癌变的差异转录本有1343个，其中mRNA有797个，lncRNA有419个。生物学信息学包括Gene Ontology、KEGG、lncRNA-mRNA调控网络共表达分析。第三，PDPN在52例DLE组织中免疫表达率为36.5%，44例未癌变中表达率是27.3%，8例癌变中表达率是87.5%，PDPN的阳性表达的癌变风险度是18.67倍，结合课题组前期PDPN在红斑和扁平苔藓中研究结果，该蛋白是评价OPMD癌变风险很有临床价值的蛋白标记物。.科学意义：DNA定量分析技术具有无创、简便、依从性好等特点，可动态的监测癌变，对疾病的发展趋势及口腔癌的早期诊断具有重要意义。完成lncRNA-mRNA表达谱的构建，包括PDPN相关的lncRNA分析，获取特异性基因的功能及传导通路，为进一步研究白斑的癌变机制奠定理论依据。

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