抗乙肝表面抗原单链抗体嵌合抗原受体基因转导T细胞清除肝外组织HBV微量病毒库的研究

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基本信息

  • 批准号：
    81670590
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    58.0万
  • 负责人：
    卢实春
  • 依托单位：
    中国人民解放军总医院
  • 学科分类：
    H0314.消化系统器官移植
  • 结题年份：
    2020
  • 批准年份：
    2016
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2017-01-01 至2020-12-31

项目摘要

Long term use of current anti-hepatitis B virus drugs can control HBV DNA copy numbers in most chronic HBV infected patients (CHB). However, HBV can not be cleared completely and cause virus resurgence after stopping medication. The clearance of minimal residual HBV is dependent upon reconstitution of patients’ HBV specific T cell responses. Anti-HBV surface antigen single chain antibody gene transduced T cell （αHBsAg-CAR-T） technology is able to restore HBV specific T cell response by making T cells acquire HBV specific recognition ability from HBV infected patients, where the HBV specific T cells were exhausted due to HBV infection. In this study, minimal residue HBV positive liver transplantation recipients will be objectives for study. Single chain gene of HBV surface antigen specific mAb from a complete recovered HBV patient will be used to construct HBsAg-CAR gene vector to transduce patients T cells to obtain HBsAg-CAR-T cells. Those cells will be studied for their ability in clearing minimal residue HBV in bone marrow CD34+ cells and PBMCs in vitro. By establishing animal model which mimic extra-liver infection of HBV after liver transplantation, the safety and effective dosage of HBsAg-CAR-T cells will be studied, and the relationship between HBV clearance and reconstitution of anti-HBV specific T cell response will be evaluated.
抗乙肝病毒（HBV）药物可控制大多数患者的HBV DNA拷贝数，却难以清除病毒，造成停药后病毒反弹。彻底清除患者体内的HBV“微量病毒库”，依赖于患者抗HBV特异性T细胞免疫应答的重建，是HBV治愈的关键。通过抗乙肝表面抗原单链抗体嵌合抗原受体基因转导T细胞(αHBsAg-CAR-T)技术，可使患者T细胞重获识别HBV的能力，重建HBV免疫应答。本研究以确诊HBV微量病毒库阳性的肝移植患者为研究对象，使用来源于感染痊愈患者的HBV表面抗原特异性抗体基因构建HBV-CAR基因载体，获取患者αHBsAg-CAR-T细胞，体外研究患者自体包含HBV微量病毒库的骨髓CD34+细胞和PBMCs细胞中病毒清除；建立动物模型，模拟肝移植术后HBV肝外感染，利用HBV-CAR-T细胞进行CAR-T使用的安全性和有效性剂量摸索，并初步观察其清除HBV微量病毒库的有效性与抗HBV特异性T细胞重建的关系。

结项摘要

慢性乙型肝炎（Chronic Hepatitis B，CHB）是全球所面临的重大传染病问题，已有的治疗手段都难以彻底清除乙肝病毒。CHB是由于患者杀伤HBV的T细胞数量、功能异常，不能彻底清除病毒，导致慢性炎症和肝癌。抗乙肝表面抗原单链抗体嵌合抗原受体基因转导T细胞(αHBsAg-CAR-T)技术，可使患者T细胞重获识别HBV的能力，重建HBV免疫应答。肝移植患者正是较好的利用HBV特异性T细胞进行免疫重建，预防再次癌变的模型。本研究构建了高效转导T细胞的HBV-CAR慢病毒，获得的HBV-CAR-T细胞在体外培养过程中可保持较高活率和扩增倍数。体外细胞实验证实了HBV-CAR-T细胞可特异性的识别HBsAg+的肝癌细胞，促进杀伤性细胞因子分泌水平升高，对比未转导T细胞和Mock转导T细胞，其对HBsAg+的肝癌细胞PLC/PRF/5、HepAD38和HepG2.2.15的杀伤率显著升高达90%以上，可有效降低培养上清液中HBV DNA的含量。为了进一步验证此功能，我们还优化了人原代肝细胞体外长期培养的条件，获得了人诱导肝细胞(hiHeps)以期构建HBV+正常人肝细胞模型，用以验证HBV-CAR-T细胞体外杀伤HBV+细胞的能力。另外我们还发现，不仅在细胞实验中，HBV-CAR-T细胞与肿瘤细胞共培养能显著促进细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-2、GM-CSF的释放，还可显著促进小鼠体内IFN-γ和TNF-α水平的提高，抑制小鼠肝癌皮下成瘤模型的肿瘤生长，大量浸润肿瘤组织并使其坏死，在靶抗原HBsAg的刺激下在体内增值，保持较强的存活力，并可预防肝癌种植。综上，本课题成功构建了可特异性识别HBsAg+的HBV-CAR-T细胞，证明该HBV-CAR-T 细胞具有很强的识别并杀伤HBsAg+细胞的能力，有希望使用自体HBV-CAR-T细胞重建肝移植患者抗HBV T细胞免疫，同时为肝移植术后肝癌复发提供了新的治疗思路。

项目成果

期刊论文数量（8）
专著数量（0）
科研奖励数量（2）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
Preoperative Serum IL6, IL8, and TNF- α May Predict the Recurrence of Hepatocellular Cancer
术前血清IL6、IL8和TNF-α可预测肝细胞癌的复发
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2019
  • 期刊：
    Gastroenterol Res Pract
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    Huayong Cai;Yu Zhang;Fanyu Meng;Chao Cui;Hao Li;Minghao Sui;Haoyun Zhang;Shichun Lu
  • 通讯作者：
    Shichun Lu
Long-term consequences of stopping HBIG and/or nucleotide analogues in liver transplant recipients administered hepatitis B vaccination to prevent HBV reinfection
为预防 HBV 再感染而接种乙型肝炎疫苗的肝移植受者停止 HBIG 和/或核苷酸类似物的长期后果
  • DOI：
    10.1111/jvh.13164
  • 发表时间：
    2019-07-01
  • 期刊：
    JOURNAL OF VIRAL HEPATITIS
  • 影响因子：
    2.5
  • 作者：
    Duan，Bin-Wei;Tian，Lan-Tian;Lu，Shi-Chun
  • 通讯作者：
    Lu，Shi-Chun
Generation of human hepatocytes from extended pluripotent stem cells.
从扩展的多能干细胞生成人肝细胞
  • DOI：
    10.1038/s41422-020-0293-x
  • 发表时间：
    2020-09
  • 期刊：
    Cell research
  • 影响因子：
    44.1
  • 作者：
    Wang Q;Sun D;Liang Z;Wang J;Zhong X;Lyu Y;Cao J;Lin Z;Du Y;Miao Z;Lu S;Li C;Xu J;Shi Y;Deng H
  • 通讯作者：
    Deng H
Two cases of intrahepatic cholangiocelluar carcinoma with high insertion-deletion ratios that achieved a complete response following chemotherapy combined with PD-1 blockade
高插入缺失率肝内胆管细胞癌化疗联合PD-1阻断后获得完全缓解2例
  • DOI：
    10.1186/s40425-019-0596-y
  • 发表时间：
    2019-05-07
  • 期刊：
    JOURNAL FOR IMMUNOTHERAPY OF CANCER
  • 影响因子：
    10.9
  • 作者：
    Sui, Minghao;Li, Yu;Lu, Shichun
  • 通讯作者：
    Lu, Shichun
Long-term functional maintenance of primary human hepatocytes in vitro
原代人肝细胞体外长期功能维持
  • DOI：
    10.1126/science.aau7307
  • 发表时间：
    2019-04-26
  • 期刊：
    SCIENCE
  • 影响因子：
    56.9
  • 作者：
    Xiang, Chengang;Du, Yuanyuan;Deng, Hongkui
  • 通讯作者：
    Deng, Hongkui

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其他文献

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  • 作者：
    武聚山;戴军;曾道炳;卢实春;赖威
  • 通讯作者：
    赖威

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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