携带TGEV S和PEDV S双基因的减毒沙门氏菌口服疫苗的免疫机制研究

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基本信息

  • 批准号：
    31072144
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    28.0万
  • 负责人：
    黄小波
  • 依托单位：
    四川农业大学
  • 学科分类：
    C1806.兽医传染病学
  • 结题年份：
    2013
  • 批准年份：
    2010
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2011-01-01 至2013-12-31

项目摘要

猪传染性胃肠炎（TGE）和猪流行性腹泻（PED）是两种最常见的猪肠道病毒病。肠道粘膜免疫对TGE和PED的防控具有重要意义，提高疫苗诱导肠道粘膜免疫水平是新型疫苗研究的重要方向。本研究拟构建携带TGEV S基因（St）和PEDV S基因(Sp)的双基因减毒沙门氏菌口服疫苗，并研究其特殊的口服免疫诱导机制。用RT-PCR扩增St、 Sp基因，将两个基因拼接后插入pVAX1载体，构建表达质粒pVAX-St/Sp，再电转化入减毒沙门氏菌SL7207中，筛选获得疫苗菌株SL7207（pVAX-St/Sp），并对筛选的疫苗菌株进行全面的生物学特性鉴定；将疫苗菌株SL7207（pVAX-St/Sp）口服免疫小鼠和猪，研究其口服免疫的诱导机制（细胞免疫、体液免疫动态规律、肠道局部粘膜抗体sIgA动态规律、抗体中和活性分析、攻毒保护试验等）。本研究对TGE和PED的防控具有重要的学术价值和应用前景。

结项摘要

本研究以减毒沙门氏菌为载体构建了PEDV S和TGEV S双基因口服疫苗，并口服免疫小鼠及仔猪阐明其免疫诱导机制。以RT-PCR扩增PEDV的S基因抗原编码区域（简称Sp ，长2367bp）及TGEV的S基因主要抗原编码区（简称St ，长1896bp，编码S蛋白N末端1-632氨基酸位点），插入双启动子真核表达载体pVAXD中构建了pVAXD-St/Sp表达载体。经免疫荧光法鉴定Sp基因和St基因可在COS-7细胞中正常表达，将pVAXD-St/Sp电转入鼠伤寒减毒沙门菌SL7207中，构建了携带双基因的重组减毒沙门菌SL7207（pVAXD-St/Sp ），通过口服免疫仔猪及小鼠，研究其口服免疫机制。本研究取得的成果如下：（1）构建了可共表达PEDV S基因和TGEV S基因的双启动子真核表达质粒pVAX-St/Sp；（2）构建了携带PEDV和TGEV S双基因的口服疫苗SL7207（pVAX-St/Sp ），该菌株具有良好的体内稳定性、体外稳定性，口服免疫小鼠具有安全性；（3）双基因疫苗SL7207（pVAX-St/Sp ）具有良好的免疫原性，同时具备两个S基因的免疫功能，可诱导针对两个S蛋白的免疫反应（包括体液免疫、肠道粘膜免疫和细胞免疫反应。口服免疫小鼠和仔猪后，2周～8周均可检测到明显的血清IgG和肠道粘膜IgA抗体；可诱导明显的外周血和脾脏T淋巴细胞增殖反应；可诱导产生明显的IFN-γ和IL-4水平；诱导产生的抗体具有病毒中和能力。仔猪免疫试验结果还表明，双启动子口服疫苗SL7207（pVAX-St/Sp）可诱导的细胞免疫效果优于单基因免疫组。本研究为评价TGEV和PEDV双基因口服疫苗提供了为科学依据，为后续口服疫苗的应用奠定了基础，具有重要的学术价值和应用价值。

项目成果

期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
PEDV和TGEV双基因共表达载体PVAXD-PS1-TS构建及体外表达
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    中国兽医学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    廖晓丹;曹三杰;黄小波;唐颖;文心田
  • 通讯作者：
    文心田
PEDV和TGEV双基因共表达载体pVAXD-PS1-TS的构建及体外表达
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    中国兽医学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    廖晓丹;曹三杰;黄小波;唐莹;文心田
  • 通讯作者：
    文心田
猪传染性胃肠炎病毒S基因B、C抗原位点的克隆与表达及间接ELISA方法的建立
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    中国兽医杂志
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    尹杰
  • 通讯作者：
    尹杰

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  • 通讯作者：
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    2016
  • 期刊：
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    宋俊凯;黄小波;高玉魁
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面向大数据流的在线多核学习算法
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  • 期刊：
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  • 作者：
    张钢;黄英;印鉴;黄小波
  • 通讯作者：
    黄小波

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

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本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
          H --> I[数据收集与分析]
          I --> J[结果解释与科学验证]
          J --> K[研究结论与未来方向]
          K --> L[研究结束]
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