不稳定Foxp3+ T细胞在类风湿性关节炎中的作用

Unstable Foxp3 expression non-Treg cells could secret inflammatory cytokines and mediate the balance between regulatory T cell and effector T cell. Through Foxp3-gene transfered arthritis animal model, it is newly reported that exFoxp3+ T cell is related with the pathogenesis of arthritis. Due to the lack of specific surface marker, the role of exFoxp3+ T cell in RA is still unknown. Our previous research found that CD39/CD45RO combined with CD4/CD25 could identify this subset. In order to access the function of the exFoxp3+ T cell in RA patients, we would like to utilize this method to determine the frequency and function of exFoxp3+ T cell, the mechanism of conversion into Th17 cell as well as the effects on the differentiation of osteoclast. This study may provide a new strategy in the autoimmune disorder in the pathogenesis of RA, which could be the new therapy target.

Foxp3不稳定表达的非调节性T细胞（exFoxp3+ T cell），可以分泌炎性细胞因子，介导调节性T细胞和效应T细胞间的平衡。利用Foxp3转基因自身免疫关节炎模型，最新的研究发现exFoxp3+T细胞和关节炎的发生发展密切相关，颠覆了传统研究认为的Foxp3+T细胞只介导免疫耐受的观点。由于缺乏特异性表面标志，迄今对exFoxp3+ T cell在类风湿关节炎（RA）中的作用尚不清楚。我们的前期研究发现利用表面标志物CD39/CD45RO联合CD4/CD25可以鉴定出该类细胞。为此，本研究拟利用这一模型，通过研究exFoxp3+ T细胞在RA中的比例和功能，如何转化为效应型Th17细胞以及是否促进破骨细胞分化等方面，研究exFoxp3＋T细胞在类风湿关节炎发生发展中的作用。本研究将为RA免疫紊乱发生机制提供新的思路，为寻求RA新的治疗靶点提供新的理论和实验依据。

本研究内容无明显调整。发现在CD4+CD25++的基础上，CD39结合CD45RO可以更精确地定义调节性T细胞亚群，这为测定调节性T细胞在炎症性关节炎中的作用提供更可靠的表型鉴定。 通过microarray对效应型调节性T细胞和幼稚型调节性T细胞的基因表达进行了分析，发现二者在基因表达谱存在很大差别，效应型调节性T细胞表达抑制功能相关的分子，并且表达相关记忆效应型标志。和幼稚型调节性T相比，效应性调节性T细胞的凋亡通路被激活，说明效应型调节性T细胞在激活后可走向凋亡。可以将naïve Treg在体外扩增诱导为effector Treg，并且保持高效的抑制功能，为体外细胞治疗提供一个可能的策略。对FOXP3+T细胞亚群进行TCR受体库高通量测序分析，发信G1和G2细胞的有一定的重复覆盖率，这也说明G1和G2在分化过程中有一定的关联，这可能和G1、G2在体外接受了相同的抗原刺激后产生，G1细胞中的Foxp3+的细胞很可能是”Revertant ” Treg，现在可以产生细胞因子。我们还发现G3细胞和其他亚群之间有很小的覆盖（小于0.5%），这意味着幼稚型调节性T 细胞没有和效应性调节性T细胞共享相同的TCR, 也就是说幼稚型调节性T细胞从胸腺释放出来时，没有扩增的克隆。测定了 FOXP3+ T细胞亚群在RA外周血中的数量: 通过流式细胞术测定FOXP3+ T细胞亚群的比例，包括exFOXP3+ non-Treg细胞、效应型Treg、幼稚型Treg比例测定，发现FOXP3+ T细胞总体比例在RA患者中下降，但是在FOXP3+ T细胞中，non-Treg（CD45RO+FOXP3low） 亚群比例上升，而幼稚型Treg（CD45RO-FOXP3low）及效应型Treg（CD45RO+FOXP3hi）下降。此外，这一结果应我们的表面标志模型CD4CD25CD39CD45RO也进一步得到了证实。此外，我们还发现炎症性关节炎患者外周血中Foxp3+ Non-Treg过度活化，可以分泌更多的炎性细胞因子，这可能也参与了炎症性关节炎的免疫功能紊乱。该项目提供了一种新的调节性T细胞表型分类，在CD4+CD+的基础上，CD39结合CD45RO可以更精确地定义调节性T细胞亚群和FOXP3+ Non-Treg。 为研究人调节性T细胞功能提供很好的模型。

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