TRPC6基因沉默对足细胞的影响

Podocyte is a kind of end-stage differentiated cell that covered above the surface of glomerular basement membrane.The present studies have demonstrated that the injury of podocyte could result proteinuria. Podocyte skelemin is used to maintain it,s normal shape.Transient receptor potential cationic channel protein 6（TRPC6）is a kind of nonselective cation channels,and it is located in glomerular podocyte. The rearrangement of cytoskeleton can be mediated by TRPC6 directly,and the alter of cytoskeleton is closely associated to proteinuria.Therefore,blocking the overexpression of pathologic TRPC6 may be an important method for podocyte protection.Objective:Use the method of RNA interference to observe the curative effect of TRPC6 gene silencing in nephritic disease.Method:The experimental methods of molecular biology, immunofluorescence and immunohistochemistry were used in this research.Make the experimental group as TRPC6 overexpression,and make the control group as TRPC6 gene silencing.Then,observe the differences in curative effect between two groups,and discuss the treatment to chronicity renal disease. Significance:The injury of podocyte of proteinuria patients can be lessened by inhibition the gene expression of TRPC6,so as to delay the renal failure development.

背景：足细胞是覆盖于肾小球基底膜表面的终末期分化细胞，近年来研究已证实，足细胞的损伤必然导致大量蛋白尿。足细胞骨架蛋白是维持足细胞正常形态的分子基础，而瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（TRPC6）是一个非选择性阳离子通道，被定位于肾小球足细胞，TRPC6可直接介导细胞骨架的重排，故其结构的改变和尿蛋白发生有密切关系。因此，阻断病理状态下TRPC6的过表达可能是保护足细胞损伤的重要手段。目的：本课题目的是为了阐明利用RNA干扰技术观察诱导TRPC6基因沉默治疗肾脏疾病的疗效。方法：采用分子生物学、免疫荧光、免疫组织化学等实验手段，研究因TRPC6过表达致足细胞损伤，采用RNA干扰技术诱导TRPC6基因沉默后的表达与对照组之间的疗效差异，以探讨慢性肾性肾脏病治疗方案。意义：期望早期对TRPC6的活动进行干预来减少对蛋白尿患者足细胞的损伤，延缓肾衰竭的进展。

肾小球中足细胞作为尿蛋白的滤过屏障起着重要的作用，其骨架蛋白是维持足细胞正常形态的分子基础。定位于足细胞上得瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（TRPC6） 直接介导细胞骨架的重排，其结构的改变和尿蛋白发生有密切关系。本项目通过利用RNA 干扰技术诱导TRPC6 基因沉默对TRPC6基因在肾脏疾病发病机制中的作用进行了初步研究。首先通过构建TRPC6干扰载体，转染正常诱导分化过程中的足细胞，确定TRPC6基因对维持足细胞正常结构和功能的蛋白的重要性，TRPC6表达的改变引起足细胞裂孔隔膜蛋白的Nephrin、CD2AP和骨架蛋白α-Actinin4的表达异常，从而引起足细胞结构的破坏；进而制备TRPC6重组腺病毒载体，对微小病变与局灶节段性肾小球硬化症模型小鼠进行基因治疗，通过western blot、免疫组化和ELISA等方法分析TRPC6基因治疗疗效和TRPC6在足细胞损伤中的作用，结果显示，TRPC6重组腺病毒载体可改善微小病变和局灶节段性硬化症小鼠的肾功能，且通过抑制TRPC6基因的表达调控肾小球纤维化和凋亡相关的TGF-β1/SMAD3与p38MAPK信号途径，进而改善或延缓肾小球硬化病变进程。综合上述结果，本研究为探讨TRPC6诱导的足细胞损伤相关疾病发病机制以及基因治疗的研究奠定了坚实的工作基础，同时为临床慢性肾炎治疗提供了启示性的理论依据。

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