鱼类弹状病毒核蛋白N的caspases切割机制及对病毒复制和致病性影响的研究

结题报告
项目介绍
AI项目解读

基本信息

  • 批准号：
    31101931
  • 项目类别：
    青年科学基金项目
  • 资助金额：
    23.0万
  • 负责人：
    周广舟
  • 依托单位：
    河南工业大学
  • 学科分类：
    C1908.水产生物病原学与病害控制
  • 结题年份：
    2014
  • 批准年份：
    2011
  • 项目状态：
    已结题
  • 起止时间：
    2012-01-01 至2014-12-31

项目摘要

一些病毒在感染细胞的过程中能激活caspases酶并诱导细胞凋亡，而激活的细胞caspases酶又能对病毒蛋白进行特异性的切割，目前发现这种切割效应会影响到病毒的复制或致病性。但目前弹状病毒这方面的研究却尚未见报道。申请人前期的研究表明，鱼类弹状病毒的核蛋白N切割同激活的caspases酶存在一定的联系。本项目拟通过定点突变、FLICA和Western blotting等技术研究N蛋白的特异性切割机制，并以SVCV弹状病毒为模型鉴定其N蛋白的特定caspases酶切位点，结合病毒滴度测定和qRT-PCR阐明N蛋白切割对子代弹状病毒复制的影响。进一步利用定点突变和反向遗传系统，构建能表达N蛋白caspases酶切位点突变体的重组SVCV病毒，感染鲤鱼后分析核蛋白N的caspases切割对弹状病毒致病力的影响。本项目的完成将为理清鱼类弹状病毒的致病机理和诱导宿主细胞凋亡机制等研究提供理论基础。

结项摘要

在国家自然科学青年基金（N0.31101931）的资助下，我们以鱼类弹状病毒为研究对象，鉴定了其核蛋白N的caspases切割，初步确定了具体的切割位点，分析了该切割效应对子代病毒复制的影响。在此基础上，开展了一些弹状病毒诱导鱼类细胞自噬和凋亡相互作用关系的研究，为后续深入研究弹状病毒的致病机理奠定了基础。.一、主要研究结果：.（1）以鱼类弹状病毒（Siniperca chuatsi rhabdovirus, SCRV）为主要对象，克隆并成功构建了其N基因不同片段长度的pEGFP-N3真核和全长片段的pET32a原核表达载体，并制备抗N蛋白血清。合成特异性的N基因的siRNAs分子，转染细胞后进行病毒感染，检测发现抑制N蛋白的表达导致子代病毒滴度的降低。SCRV感染EPC等细胞系后，Western blotting检测到N蛋白出现特异性切割，N基因转染EPC细胞后也证实出现切割现象，且N基因siRNA能抑制N蛋白的切割。.（2）Caspases酶抑制剂z-VAD-FMK处理EPC细胞后，在SCRV病毒感染或其N基因转染条件下，发现其N蛋白的切割均被抑制，提示caspases酶介导了N蛋白的胞内切割。.（3）将不同长度的N基因缺失片段的pEGFP-N3重组表达载体转染细胞后，Western blotting鉴定其caspases切割位点，根据caspases酶切特点和N基因片段表达情况初步证实在D324和D374氨基酸位点进行了特异性的切割。.（4）z-VAD-FMK处理SCRV感染的EPC细胞，能明显抑制细胞病变的发生，但子代病毒滴度测定显示病毒的复制量并没有产生明显变化，这与以前有关哺乳动物弹状病毒VSV的报告一致。.（5）初步开展了SCRV病毒诱导细胞自噬的研究，吖啶橙染色分析SCRV感染后细胞有自噬泡出现。SCRV感染后的EPC细胞内LC3-II表达逐渐增多，表明SCRV诱导细胞自噬的发生。.二、取得的主要成果：.（1）明确了鱼类弹状病毒感染过程中其N蛋白的caspases切割现象和具体切割位点，证实了其对子代病毒复制的影响，并初步探讨了弹状病毒诱导细胞自噬的相关机制。.（2）依托该基金资助，目前以第一作者身份发表SCI刊源论文4篇，中文核心期刊论文3篇，合作发表中文核心期刊论文1篇。.（3）培养硕士研究生2名。

项目成果

期刊论文数量（11）
专著数量（0）
科研奖励数量（0）
会议论文数量（0）
专利数量（0）
LAMP技术在动物病毒病原检测中的应用进展.
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2013
  • 期刊：
    中国人兽共患病学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    徐苏丽;周广舟;谭晓荣;陈小兵
  • 通讯作者：
    陈小兵
Inhibition of Siniperca chuatsi Rhabdovirus by RNA Interference in a Fish Cell Line
RNA干扰对鱼细胞系中鳜鱼弹状病毒的抑制作用
  • DOI：
    10.3147/jsfp.47.30
  • 发表时间：
    2012-03-01
  • 期刊：
    FISH PATHOLOGY
  • 影响因子：
    0.6
  • 作者：
    Zhou, Guang-Zhou;Zhu, Rong;Zhang, Qi-Ya
  • 通讯作者：
    Zhang, Qi-Ya
Specific Cleavage of the Nucleoprotein of Fish Rhabdovirus
鱼弹状病毒核蛋白的特异性裂解
  • DOI：
    10.1177/0300985815570068
  • 发表时间：
    2015-11-01
  • 期刊：
    VETERINARY PATHOLOGY
  • 影响因子：
    2.4
  • 作者：
    Zhou, G. -Z.;Yi, Y. -J.;Zhang, Q. -Y.
  • 通讯作者：
    Zhang, Q. -Y.
SPAN style=FONT-FAMILY: times= new= roman?,?serif?;font-size:11pt;?=Novel curcumin analogue IHCH exhibits potent anti-proliferative effects by inducing autophagy in A549 lung cancer cells/span
新型姜黄素类似物 IHCH 通过诱导 A549 肺癌细胞自噬表现出有效的抗增殖作用
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2014
  • 期刊：
    Molecular Medicine Reports
  • 影响因子：
    3.4
  • 作者：
    Guang-Zhou Zhou;Su-Li Xu;Gang-Chun Sun;Xiao-Bing Chen
  • 通讯作者：
    Xiao-Bing Chen
活性氧对植物自噬调控的研究进展
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    2012
  • 期刊：
    植物学报
  • 影响因子：
    --
  • 作者：
    景红娟;周广舟;谭晓荣;平康康;任雪建
  • 通讯作者：
    任雪建

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其他文献

Mechanism of curcumin analog MHMD-induced cell death in A549 lung cancer cells
姜黄素类似物MHMD诱导A549肺癌细胞死亡的机制
  • DOI：
    --
  • 发表时间：
    --
  • 期刊：
    European Review for Medical and Pharmacological Sciences
  • 影响因子：
    3.3
  • 作者：
    陈小兵;周广舟
  • 通讯作者：
    周广舟

其他文献

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课题项目：调控A型流感病毒诱导IFN-β表达的机制研究

AI项目摘要：

本研究聚焦于TRIM2蛋白在A型流感病毒诱导的IFN-β表达中的调控机制。A型流感病毒是全球性健康问题，其感染可导致严重的呼吸道疾病。IFN-β作为关键的抗病毒因子，其表达水平对抗病毒防御至关重要。然而，TRIM2如何调控IFN-β的表达尚未明确。本研究假设TRIM2通过与病毒RNA或宿主因子相互作用，影响IFN-β的产生。我们将采用分子生物学、细胞生物学和免疫学方法，探索TRIM2与A型流感病毒诱导IFN-β表达的关系。预期结果将揭示TRIM2在抗病毒免疫反应中的作用，为开发新的抗病毒策略提供理论基础。该研究对理解宿主抗病毒机制具有重要科学意义，并可能对临床治疗流感病毒感染提供新的视角。

AI项目思路：

科学问题：TRIM2如何调控A型流感病毒诱导的IFN-β表达？
前期研究：已有研究表明TRIM2参与抗病毒反应，但其具体机制尚不明确。
研究创新点：本研究将深入探讨TRIM2在IFN-β表达中的直接作用机制。
技术路线：包括病毒学、分子生物学、细胞培养和免疫检测技术。
关键技术：TRIM2与病毒RNA的相互作用分析，IFN-β启动子活性检测。
实验模型：使用A型流感病毒感染的细胞模型进行研究。

AI技术路线图

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          A[研究起始] --> B[文献回顾与假设提出]
          B --> C[实验设计与方法学准备]
          C --> D[A型流感病毒感染模型建立]
          D --> E[TRIM2与病毒RNA相互作用分析]
          E --> F[TRIM2对IFN-β启动子活性的影响]
          F --> G[IFN-β表达水平测定]
          G --> H[TRIM2功能丧失与获得研究]
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          J --> K[研究结论与未来方向]
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