microRNA302c在腹膜透析腹膜纤维化中的作用及分子机制

腹膜透析（PD）是符合我国国情的主要肾脏替代治疗手段，但长期腹膜透析可导致腹膜间皮细胞EMT及纤维化。microRNA是非编码RNA，参与调控相关基因表达，是目前生命科学领域的研究热点。近期我们采用高通道miRNA芯片技术对PD病人腹透流出液腹膜间皮细胞miRNA表达进行了分析，发现miRNA异常表达与PD患者腹膜EMT及纤维化密切相关，因此从miRNA着手研究其在PD过程EMT及纤维化中的作用及分子机制具有重要的理论和现实意义。本项目结合我们以往的研究基础，采用细胞分子生物学及PD动物模型，通过观察miR-302c在PD腹膜间皮细胞的表达，分析其与TGF-β1,CTGF及EMT相关基因的关系，鉴定TGF-β1调节miR-302c表达的分子机制，研究miR-302c在腹膜间皮细胞EMT及腹膜纤维化的作用及相关机制，旨在为阐明PD过程中EMT及腹膜纤维化的发生机制提供新的理论依据。

腹膜透析（PD）是符合我国国情的主要肾脏替代治疗手段，但长期腹膜透析可导致腹膜间皮细胞向间充质细胞转分化（EMT）及纤维化。microRN是非编码 RNA，参与调控相关基因表达，是目前生命科学领域的研究热点。我们的前期研究采用高通道miRNA芯片技术对PD患者腹透流出液腹膜间皮细胞miRNA表达进行了分析，发现miRNA异常表达与 PD 患者腹膜EMT及纤维化密切相关，因此从 miRNA着手研究其在PD过程EMT及纤维化中的作用及分子机制具有重要的理论和现实意义。本项目中我们发现CAPD患者腹透流出液腹膜间皮细胞表达microRNA302c，并随透析时间延长表达量降低。维持透析一年组相较于新开管组结缔组织生长因子（CTGF）及EMT相关蛋白vimentin、zo-1表达异常，提示随透析时间延长患者流出液细胞发生EMT。相关性分析提示microRNA302c与CTGF及EMT相关基因表达改变有关。在接下来的体内体外试验中，我们发现microRNA302c在PD小鼠模型及TGF-β1诱导的人腹膜间皮细胞中均表达下调，同时发现CTGF是microRNA302c的下游靶基因。microRNA302c的下调导致CTGF过表达及EMT相关基因表达改变。我们成功构建了稳定表达鼠/人microRNA302c的慢病毒载体。LV-mmu-miR-302c转染至小鼠体内可有效上调microRNA302c的表达，从而减轻PD小鼠模型腹膜的纤维化形态改变，上调PD模型中的腹膜E-cadherin表达，下调α-SMA 、collagenⅠ表达。同时PD引起的CTGF过表达得到有效抑制。LV-hsa-miR-302c转染人腹膜间皮细胞得到类似结果（2012 ASN 壁报）。上调microRNA302c可通过抑制CTGF的表达延缓TGF-β1诱导的人腹膜间皮细胞EMT。本项目已发表相关论文六篇（见附件），为阐明 PD 过程中 EMT 及腹膜纤维化的发生机制提供了新的理论依据。

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