雷纳度胺联合MEK抑制剂对骨多发郎格罕氏细胞增生症细胞增殖及破骨样多核巨细胞转化的抑制及其机制的探索性研究

The most common site of single-system Langerhans cell histiocytosis (LCH) is bone, mainly osteolytic changes. In the early stage of this study, a relapsed adult multiple bone LCH patient was treated with LEN combined with smectinide to obtain long-term stability. The HAT chip of bone puncture tissue was detected before and after treatment. According to the difference of non-coding and coding RNA levels, the focus was on the long-non-coding WFDC21P through the signal pathways of micro128/IRS1/MAPK and micro214/Smad4/RANKL. The level of WFDC21P in 8 patients with LCH was significantly higher than that in healthy controls. The hypothesis that ranadomide and MEK inhibitors synergistically inhibit the proliferation of LCH cells and the transformation of osteoclast-like multinucleated giant cells (MGC) was proposed. The next steps are as follows: 1) To construct immortalized primary cell lines of bone LCH, and to verify the synergistic effect of LEN and smectinib respectively or jointly, and explore how WFDC21P regulates the signal systems of mir-128/IRS1/MAPK and mir-214/Smad4/RANKL in LCH cells; 2) To construct PDX model to verify the mechanism in vitro. To provide a theoretical basis for LEN combined with MEK inhibitors in patients with recurrent refractory low-risk bone multiple LCH.

单系统郎格罕细胞组织细胞增生症(LCH)最常见发病部位为骨，以溶骨性改变为主。本研究前期对1例复发成人多发骨LCH患者应用雷纳度胺(LEN)联合司美替尼治疗获得疾病长期稳定，治疗前后病灶骨穿刺组织HAT芯片检测，根据非编码及编码RNA水平差异的结果，聚焦于长非编码WFDC21P通过miR-128/IRS1/MAPK 和miR-214-5p/Smad4/RANKL信号通路。检测8例LCH患者血WFDC21P水平显著高于健康对照。提出“雷纳度胺与MEK抑制剂协同抑制LCH细胞增殖及破骨样多核巨细胞（MGC）转化”的假说。拟下一步:1)构建骨LCH永生化原代细胞系，以LEN与司美替尼分别或联合干预，验证 LEN与司美替尼是否有协同作用，探索WFDC21P如何调节LCH细胞信号系统的机制；2)构建PDX模型验证体外机制。为复发难治低危骨多发LCH患者使用LEN联合MEK抑制剂提供理论基础。

朗格汉斯细胞组织细胞增多症(Langerhans’cell histiocytosis, LCH)是一组罕见的病因不明的以CD1a+/Langerin+ LCH细胞广泛各组织的疾病，从一种可能自发进入缓解期的单器官疾病，到一种可能导致死亡的全身性和侵袭性疾病。任何器官都可以受累，但骨和皮肤受累的频率更高。临床主要的挑战是LCH的复发和相关的永久性后果。已知LCH存在是RAS-RAF-MEK-ERK信号系统活化通路信号异常活化，半数以上的LCH患者样本中发现了BRAF(V600E)功能获得性突变，但在人和鼠DC细胞单点突变BRAF(V600E)并不诱导DC细胞的异常增殖及分化。在过去的几十年中，LCH临床试验的总体结果有所改善，但高危患者的无进展生存率仍不到50%。本研究旨在探寻LEN和MEK抑制剂是否通过甲基化调节WFDC21P/LncDC的表达；验证WFDC21P/LncDC是否作为ceRNA调节miR-214-5p和miR-128表达间接调控IRS1/MAPK和Smad4/RANK信号通路。对比了MEK抑制剂司美替尼联合LEN方案治疗难治骨多发LCH患者（MAP3K1基因L318Cfs*4突变，KRS基因G12D突变），前后病灶组织长非编码LncRNA及miR及mRNA生物信息分析网络，发现治疗后RANKL信号系统在用药后活性变化显著。miR-214-5p与WFDC21P/LncDC及Smad4均互补结合。Smad家族蛋白分成R-Smad，Co-Smad和I-Smad 3个亚家族9种蛋白，其中Co－Smad成员即Smad4，是TGF-β家族各类信号传导过程中共同需要的介质，是成骨细胞和破骨细胞维持骨形成和骨吸收的关键信号通路。在对5例LCH患者行全外显子基因检测后，我们发现了10个丰度较高的突变基因，其中发现ACTL9、OBSCN、QRICH2、TELO2存在纯合突变。有研究发现并证实ACTL9纯合突变导致ICSI受精失败和男性不育，高度提示LCH的发病可能来源于常染色体的纯合突变。试图寻找LCH的发病原因，利用Luminex检测技术对骨多发LCH患者化疗联合地舒单抗治疗前后行骨代谢指及细胞多因子检测，试图探索与LCH发病可能相关的细胞因子。为更好的转化为提高临床疗效，寻找治疗靶点有一定的意义。

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