vitronectin在淀粉样变性病蛋白质异常折叠中的作用机制研究

Amyloidosis is a protein misfolding disease，which lacking efficient therapy and with high mortality. The inhibition of the protein misfolding is a promising therapy target. In our previous study, proteomic analysis of the amyloid deposit indicates that, the vitronectin is a common constituent of amyloid deposits together with a mount of complement components. Previous study have indicate that the heparin binding domain of vitronectin is the key interaction domain of proteins，and the C terminal of vitronectin can inhibit the complement activation, the N-terminal of vitronectin can enhance the opsonization of complement. Depend on the above, we propose our hypothesis: vitronectin can interact with the amyloid precursor proteins via the heparin binding domain, which can promote the protein misfolding into the fibrils, and the vitronectin can inhibit complement dependent, monocyte-macrophage cell reaction which swiftly removes massive visceral amyloid deposits via the C-terminal and N-terminal. Therefore，the study will（1）explore the interaction of vitronectin with the amyloid precursors; (2) To study the mechanism of the anti-Vn antibody eradicate the amyloid fibrils via the complement system. This study is expected to find new therapy target of amyloidosis.

淀粉样变性病是一种蛋白质异常折叠疾病，目前缺乏有效的治疗手段，致死率高。抑制蛋白质异常折叠成为淀粉样变性病治疗中很有前景的靶点。我们在前期研究中曾对沉积在肾脏组织的淀粉样蛋白进行蛋白质组学分析，发现玻连蛋白（Vitronectin, Vn）广泛存在于不同类型的淀粉样沉积物中，同时伴有大量补体成分的沉积。既往的研究表明Vn的肝素结合区为蛋白质相互作用的关键结构域，Vn的C末端和N末端可以抑制补体激活、增强补体的调理作用等，因此我们提出假设：Vn可能通过其肝素结合结构域与淀粉样前体蛋白结合，促进其异常折叠形成淀粉样纤维丝，同时通过Vn的C末端和N末端的补体调节作用抑制单核巨噬细胞系统对沉积于组织上的淀粉样物质进行清除。因此，本研究将：（1）探索Vn与淀粉样变前体蛋白相互作用的机制；（2）深入探索抗Vn抗体通过激活补体系统清除淀粉样纤维丝的机制。本研究有望为淀粉样变性病寻找新的治疗靶点。

淀粉样变性病是一种蛋白质异常折叠疾病，目前缺乏有效的治疗手段，致死率高，但具体机制尚不明确。我们在对肾脏组织的淀粉样蛋白进行显微切割后质谱分析，发现玻连蛋白（Vitronectin, Vn）广泛存在于不同类型的淀粉样沉积物中。随后我们收集了经肾活检确诊的AL型淀粉样变性病患者85例、肾脏疾病对照组117例（膜性肾病31例、IgA肾病32例、狼疮性肾炎29例,糖尿病肾病25例）的血清标本及临床资料并随访，对比不同治疗方案的有效性及安全性，使用ELISA法检测血清Vn浓度，间接免疫荧光检测肾脏组织Vn表达，构建动物模型。结果：（1）纳入其中接受治疗的68名患者淀粉样变患者，其中38例接受环磷酰胺、沙利度胺、地塞米松（CTD）治疗，30例接受马法兰联合地塞米松（MDex）治疗，两组基线资料无显著差异。CTD组与MD组的血液学缓解率分别为69% vs 68%（P=0.94），完全缓解率分别为28% vs 8%（P=0.14），肾脏缓解率为53% vs 37%（P=0.22），无进展生存期分别为36 vs 14个月（P=0.24），不良反应的总体发生率分别为60%和59%，但无4-5级严重的不良反应。（2）AL型淀粉样变性病的血清Vn水平（65207.8±23846.8ng/ml）显著低于肾炎对照组（IgA肾病72174.2±16549.8ng/ml，狼疮性肾炎80334. 8±29091.8ng/ml，膜性肾病100198.2±39676.9ng/ml，糖尿病肾病72575.9±9764.7ng/ml）（P< 0.001），且Mayo分期越严重，血清Vn水平越低。AL型淀粉样变中，血清Vn水平与血肌酐水平（r=-0.403，P=0.007）、血浆白蛋白（r=-0.326，P=0.031）、血红蛋白（r=-369，P=0.014）呈负相关，与eGFR呈正相关（r=-0.323，P=0.035）。ROC曲线分析提示，血清Vn＜62398ng/ml可以预测诊断AL型淀粉样变性病的特异度为79.1%，敏感度为60.0%，曲线下面积为0.74。结论：AL型淀粉样变性患者的血清Vn水平显著低于其他肾病组，且疾病越严重、血清Vn水平越低，提示Vn在淀粉样变性发病中起着重要作用，血清Vn浓度有可能为AL型淀粉样变诊断及治疗效果的生物标志物。

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