Chemical Screen of TOR pathway GFP fusion proteins in S. cerevisiae

酿酒酵母 TOR 途径 GFP 融合蛋白的化学筛选

基本信息

  • 批准号:
    7692448
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.5万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    美国
  • 项目类别:
  • 财政年份:
    2009
  • 资助国家:
    美国
  • 起止时间:
    2009-04-16 至 2011-04-15
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

DESCRIPTION (provided by applicant): We propose an HTS multiplex screening project to use small molecules to probe a complex, highly conserved, biological pathway. The project takes advantage of the yeast GFP strain collection to probe the TOR pathway, a pathway with therapeutic implications in man [1]. The target of rapamycin, TOR, is an essential ser/thr protein kinase that functions in two distinct multiprotein complexes, TOR complexes 1 and 2. The structure and functions of these complexes have been conserved from yeast to man. TOR complex 1 is inhibited by rapamycin and is thought to couple growth cues to cellular metabolism; TOR complex 2 is not inhibited by rapamycin and appears to regulate spatial aspects of growth, such as cell polarity [2, 3]. Rapamycin, an antifungal compound isolated from a bacterium found in soil on the island of Rapa Nui [4], was the drug originally used to characterize the TOR pathway in budding yeast (S. cerevisiae) by identifying mutants that were rapamycin sensitive or resistant [5]. Rapamycin acts as a cytostatic agent in fungi, arresting cells in a G0-like state. As a drug it is widely used as an immunosuppressant and rapamycin and derivatives of this macrocyclic lactone are being evaluated for a number of clinical applications. Because of its pleiotropic effects, rapamycin is thought of as a "dirty drug" in the pharmaceutical industry. To identify more specific TOR inhibitors and activators, we propose a cell-based multiplex high throughput flow cytometry assay to screen the MLSMR to define chemicals that target specific proteins in the TOR pathway. A chemical screen should yield small molecules that modulate specific branches of this pathway and these molecules may have significant therapeutic potential and fewer side effects. We will screen the yeast GFP-fusion strain set (4,159 strains) [6] prior to and post-rapamycin treatment in multiplex format because the fusion library is highly amenable to fluorescence-based flow cytometric readout. Change in fluorescence indicates that a chemical has affected production of the target GFP-fusion protein(s). Chemicals we identify that mimic or inhibit rapamycin activation will likely have targets in other organisms because TOR pathway components are highly conserved. We have already successfully screened this collection under two different growth conditions and have the capacity to identify chemicals affecting one or more than one of the multiplexed targets. We will conduct primary screens to detect both agonists and antagonists of the TOR pathway. As secondary screens, we will: 1) compare the impact of the novel molecules on protein expression in the GFP collection and 2) evaluate the ability of the small molecules to impact the cytostatic potential of rapamycin through analysis of cell cycle and/or growth arrest. Expected Results: The screen in the absence of rapamycin will reveal molecules that mimic rapamycin or otherwise impact the TOR pathway. The screen in the presence of rapamycin will reveal molecules that antagonize rapamycin. PUBLIC HEALTH RELEVANCE: We propose an HTS multiplex screening project to use small molecules to probe a complex, highly conserved, biological pathway. The project takes advantage of the yeast GFP strain collection to probe the TOR - target of rapamycin - pathway, a pathway with therapeutic implications in man.
描述(由申请人提供):我们提出了一个 HTS 多重筛选项目,利用小分子来探测复杂的、高度保守的生物途径。该项目利用酵母 GFP 菌株集合来探测 TOR 途径,这是一种对人类具有治疗意义的途径 [1]。雷帕霉素的靶标 TOR 是一种必需的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在两种不同的多蛋白复合物(TOR 复合物 1 和 2)中发挥作用。这些复合物的结构和功能从酵母到人类均保持不变。 TOR 复合物 1 被雷帕霉素抑制,被认为将生长线索与细胞代谢结合起来; TOR 复合物 2 不受雷帕霉素抑制,并且似乎可以调节生长的空间方面,例如细胞极性 [2, 3]。雷帕霉素是一种从拉帕努伊岛土壤中发现的细菌中分离出来的抗真菌化合物[4],最初用于通过鉴定对雷帕霉素敏感或耐药的突变体来表征芽殖酵母(酿酒酵母)的 TOR 通路。 5]。雷帕霉素在真菌中充当细胞抑制剂,将细胞阻滞在 G0 样状态。作为一种药物,它被广泛用作免疫抑制剂,雷帕霉素和这种大环内酯的衍生物正在评估其多种临床应用。由于其多效性作用,雷帕霉素在制药行业被认为是“脏药”。为了鉴定更特异性的 TOR 抑制剂和激活剂,我们提出了一种基于细胞的多重高通量流式细胞术测定法来筛选 MLSMR,以确定针对 TOR 途径中特定蛋白质的化学物质。化学筛选应该产生调节该途径特定分支的小分子,这些分子可能具有显着的治疗潜力和更少的副作用。我们将以多重形式筛选雷帕霉素处理之前和之后的酵母 GFP 融合菌株组(4,159 株)[6],因为融合文库非常适合基于荧光的流式细胞仪读数。荧光的变化表明化学物质已经影响了目标 GFP 融合蛋白的产生。我们发现模拟或抑制雷帕霉素激活的化学物质很可能在其他生物体中具有靶标,因为 TOR 途径成分高度保守。我们已经在两种不同的生长条件下成功筛选了该集合,并有能力识别影响一种或多种多重靶标的化学物质。我们将进行初步筛选以检测 TOR 途径的激动剂和拮抗剂。作为二次筛选,我们将:1) 比较新分子对 GFP 集合中蛋白质表达的影响,2) 通过分析细胞周期和/或生长停滞来评估小分子影响雷帕霉素细胞抑制潜力的能力。预期结果:在没有雷帕霉素的情况下进行筛选将显示模仿雷帕霉素或以其他方式影响 TOR 途径的分子。在雷帕霉素存在的情况下进行筛选将显示拮抗雷帕霉素的分子。 公共健康相关性:我们提出了一个 HTS 多重筛选项目,利用小分子来探测复杂、高度保守的生物途径。该项目利用酵母 GFP 菌株集合来探测 TOR(雷帕霉素靶标)途径,该途径对人类具有治疗意义。

项目成果

期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)

数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}

{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI:
    {{ item.doi }}
  • 发表时间:
    {{ item.publish_year }}
  • 期刊:
  • 影响因子:
    {{ item.factor }}
  • 作者:
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ monograph.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ sciAawards.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ conferencePapers.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ patent.updateTime }}

MARGRET C. WERNER-WASHBURNE其他文献

MARGRET C. WERNER-WASHBURNE的其他文献

{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI:
    {{ item.doi }}
  • 发表时间:
    {{ item.publish_year }}
  • 期刊:
  • 影响因子:
    {{ item.factor }}
  • 作者:
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者:
    {{ item.author }}

{{ truncateString('MARGRET C. WERNER-WASHBURNE', 18)}}的其他基金

UNM Initiative to Maximize Student Diversity (IMSD)
新墨西哥大学最大化学生多样性倡议 (IMSD)
  • 批准号:
    7897582
  • 财政年份:
    2009
  • 资助金额:
    $ 2.5万
  • 项目类别:
A compendium of gene expression in stationary phase
稳定期基因表达概要
  • 批准号:
    6603267
  • 财政年份:
    2002
  • 资助金额:
    $ 2.5万
  • 项目类别:
A compendium of gene expression in stationary phase
稳定期基因表达概要
  • 批准号:
    6918508
  • 财政年份:
    2002
  • 资助金额:
    $ 2.5万
  • 项目类别:
A compendium of gene expression in stationary phase
稳定期基因表达概要
  • 批准号:
    6773925
  • 财政年份:
    2002
  • 资助金额:
    $ 2.5万
  • 项目类别:
A compendium of gene expression in stationary phase
稳定期基因表达概要
  • 批准号:
    6863490
  • 财政年份:
    2002
  • 资助金额:
    $ 2.5万
  • 项目类别:
A compendium of gene expression in stationary phase
稳定期基因表达概要
  • 批准号:
    7117932
  • 财政年份:
    2002
  • 资助金额:
    $ 2.5万
  • 项目类别:
A compendium of gene expression in stationary phase
稳定期基因表达概要
  • 批准号:
    6775059
  • 财政年份:
    2002
  • 资助金额:
    $ 2.5万
  • 项目类别:
A compendium of gene expression in stationary phase
稳定期基因表达概要
  • 批准号:
    6594090
  • 财政年份:
    2002
  • 资助金额:
    $ 2.5万
  • 项目类别:
A TWO-HYBRID SYSTEM FOR USE IN NON-DIVIDING YEAST CELLS
用于非分裂酵母细胞的双杂交系统
  • 批准号:
    6228948
  • 财政年份:
    2001
  • 资助金额:
    $ 2.5万
  • 项目类别:
A TWO-HYBRID SYSTEM FOR USE IN NON-DIVIDING YEAST CELLS
用于非分裂酵母细胞的双杂交系统
  • 批准号:
    6487838
  • 财政年份:
    2001
  • 资助金额:
    $ 2.5万
  • 项目类别:

相似国自然基金

β2AR激动剂与微秒电刺激对大鼠肛提肌线粒体有氧代谢酶及其多模态影像表型的影响研究
  • 批准号:
  • 批准年份:
    2021
  • 资助金额:
    30 万元
  • 项目类别:
    青年科学基金项目
环境激素壬基酚对变应性鼻炎的影响及其对GPER特异性激动剂G-1在变应性鼻炎治疗作用中的干扰机制研究
  • 批准号:
    82000963
  • 批准年份:
    2020
  • 资助金额:
    24 万元
  • 项目类别:
    青年科学基金项目
促生长激素释放激素激动剂抑制平滑肌细胞转分化对动脉粥样硬化的影响及机制研究
  • 批准号:
    81900389
  • 批准年份:
    2019
  • 资助金额:
    21.0 万元
  • 项目类别:
    青年科学基金项目
五羟色胺2C受体激动剂对2型糖尿病小鼠β细胞功能的影响及机制研究
  • 批准号:
    81803644
  • 批准年份:
    2018
  • 资助金额:
    21.0 万元
  • 项目类别:
    青年科学基金项目
cAMP信号激动剂对恶性胶质瘤血管新生和血管正常化的影响及机制研究
  • 批准号:
    81803568
  • 批准年份:
    2018
  • 资助金额:
    21.0 万元
  • 项目类别:
    青年科学基金项目

相似海外基金

Multifunctional Nanoparticle Platform to Prevent Alcohol-Associated HCC Development
多功能纳米颗粒平台可预防酒精相关的 HCC 发展
  • 批准号:
    10736984
  • 财政年份:
    2023
  • 资助金额:
    $ 2.5万
  • 项目类别:
Effect of maternal obesity on breast cancer among offspring: role of the gut microbiota
母亲肥胖对后代乳腺癌的影响:肠道微生物群的作用
  • 批准号:
    10734892
  • 财政年份:
    2023
  • 资助金额:
    $ 2.5万
  • 项目类别:
HER1-3 and Death Receptor protein folding as therapeutic vulnerabilities
HER1-3 和死亡受体蛋白折叠作为治疗漏洞
  • 批准号:
    10721930
  • 财政年份:
    2023
  • 资助金额:
    $ 2.5万
  • 项目类别:
CD98hc Brain Shuttles for Delivering Off-the-shelf Neuroprotective Antibodies in Alzheimer's Disease
CD98hc 脑穿梭机为阿尔茨海默病提供现成的神经保护抗体
  • 批准号:
    10566062
  • 财政年份:
    2023
  • 资助金额:
    $ 2.5万
  • 项目类别:
An exploratory randomized controlled trial of the effects of oral semaglutide on alcohol craving and consumption
口服索马鲁肽对酒精渴望和消费影响的探索性随机对照试验
  • 批准号:
    10747743
  • 财政年份:
    2023
  • 资助金额:
    $ 2.5万
  • 项目类别:
{{ showInfoDetail.title }}

作者:{{ showInfoDetail.author }}

知道了