High Throughput/Content Screens for Dynein Inhibitors

动力蛋白抑制剂的高通量/含量筛选

基本信息

  • 批准号:
    7622278
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 3.78万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    美国
  • 项目类别:
  • 财政年份:
    2006
  • 资助国家:
    美国
  • 起止时间:
    2006-09-15 至 2010-05-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

Cytoplasmic dynein is the major retrograde molecular motor responsible for transport of membranous organelles, viruses, mRNA and proteins with nuclear localization signals. It is also involved in chromosome movement, mitotic checkpoint inactivation and spindle orientation, and many other basic cellular processes. Cytoplasmic dynein is a large (ca. 2 MDa) complex of proteins. Its movement along microtubules is powered by ATP hydrolysis by its 380 kDA motor domains, which are associated with the >500 kDa heavy chain subunits. Other than weak and nonspecific redox perturbers and mimics of ATP or phosphate anion, only one small molecule inhibitor of dynein, the natural product purealin, which we have recently synthesized and examined, is known. It is, however, only weakly active in cells. New inhibitors with potency and specificity for dynein and subsets of dynein function would be invaluable cell biology tools. The goal is to develop a refined suite of high throughput cell and biochemical assays for chemical library screening find inhibitors of cellular cytoplasmic dynein. Aim 1 is to develop a cell-based phenotypic multiparameter fluorescence screen to detect dynein inhibition in interphase cells, as well as to detect possible mitotic block due to inhibition of dynein. Preliminary data provides support of three cellular events, transport from the cytoplasm to the nucleus of: (i) p53 after mild DMAdamage; (ii) stably expressed green fluorescent protein-labeled glucocorticoid receptor after binding with an agonist; and (iii) a fluorescent adenovirus. These will be examined and the most useful selected. As some phenotypes could be due to interaction of the small molecules with off-target proteins, Aim 2 is to implement high throughput biochemical screens to confirm that a small molecule's molecular target is indeed cytoplasmic dynein. These include microtiter plate-based colorimetric, turbidimetric and fluorescence polarization analyses of the direct action of library chemicals on recombinant dynein heavy chain, glucocorticoid receptor ligand binding domain, HSP70 and HSP90, and on isolated myosin and tubulin. The investigators, a team of experts in these areas, will design and perform the assays as well as interpret results, and have previous direct or related experience with most of the assays. The product of this work will be a refined, streamlined set of rapid cell and biochemical screens for dynein inhibitors that can be implemented in molecular library screening centers.
细胞质动力蛋白是负责膜物质运输的主要逆行分子马达 具有核定位信号的细胞器、病毒、mRNA 和蛋白质。也与染色体有关 运动、有丝分裂检查点失活和纺锤体定向以及许多其他基本细胞过程。 细胞质动力蛋白是一种大型(约 2 MDa)蛋白质复合物。它沿着微管的运动是有动力的 通过其 380 kDA 运动域(与 >500 kDa 重链相关)进行 ATP 水解 亚单位。除了弱的和非特异性的氧化还原干扰物以及 ATP 或磷酸根阴离子的模拟物之外,仅 动力蛋白的一种小分子抑制剂,天然产物 Purealin,我们最近合成并 经查,可知。然而,它在细胞中的活性很弱。具有效力和特异性的新型抑制剂 动力蛋白和动力蛋白功能的子集将是宝贵的细胞生物学工具。目标是开发一个精致的 一套用于化学文库筛选的高通量细胞和生化检测发现细胞抑制剂 细胞质动力蛋白。目标 1 是开发基于细胞的表型多参数荧光筛选 检测间期细胞中的动力蛋白抑制,以及检测由于抑制而可能的有丝分裂阻断 动力蛋白。初步数据支持三种细胞事件:从细胞质转运到细胞 (i) p53 轻度 DMA 损伤后的细胞核; (ii) 稳定表达的绿色荧光蛋白标记 与激动剂结合后的糖皮质激素受体; (iii) 荧光腺病毒。这些将是 检查并选择最有用的。由于某些表型可能是由于小分子的相互作用 具有脱靶蛋白质的分子,目标 2 是实施高通量生化筛选以确认 小分子的分子靶标确实是细胞质动力蛋白。其中包括基于微量滴定板的 库化学物质直接作用的比色、比浊和荧光偏振分析 重组动力蛋白重链、糖皮质激素受体配体结合域、HSP70 和 HSP90 等 分离出肌球蛋白和微管蛋白。研究人员是这些领域的专家团队,他们将设计并执行 分析以及解释结果,并且之前对大多数分析有直接或相关的经验。 这项工作的产品将是一套精炼、精简的动力蛋白快速细胞和生化筛选系统 可以在分子库筛选中心实施的抑制剂。

项目成果

期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)

数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}

{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI:
    {{ item.doi }}
  • 发表时间:
    {{ item.publish_year }}
  • 期刊:
  • 影响因子:
    {{ item.factor }}
  • 作者:
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ monograph.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ sciAawards.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ conferencePapers.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ patent.updateTime }}

BILLY W DAY其他文献

BILLY W DAY的其他文献

{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI:
    {{ item.doi }}
  • 发表时间:
    {{ item.publish_year }}
  • 期刊:
  • 影响因子:
    {{ item.factor }}
  • 作者:
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者:
    {{ item.author }}

{{ truncateString('BILLY W DAY', 18)}}的其他基金

"Protein protein interaction directed libraries"
“蛋白质蛋白质相互作用定向文库”
  • 批准号:
    8136604
  • 财政年份:
    2010
  • 资助金额:
    $ 3.78万
  • 项目类别:
High Throughput/Content Screens for Dynein Inhibitors
动力蛋白抑制剂的高通量/含量筛选
  • 批准号:
    7169712
  • 财政年份:
    2006
  • 资助金额:
    $ 3.78万
  • 项目类别:
MOLECULAR PHARMACOLOGY AND BIOCHEMISTRY OF ANTITUBULINS
抗微管蛋白的分子药理学和生物化学
  • 批准号:
    6300629
  • 财政年份:
    2000
  • 资助金额:
    $ 3.78万
  • 项目类别:
VALIDATION AND OPTIMIZATION OF TUBULIN TARGETED DRUGS
微管蛋白靶向药物的验证和优化
  • 批准号:
    6020329
  • 财政年份:
    2000
  • 资助金额:
    $ 3.78万
  • 项目类别:
MOLECULAR PHARMACOLOGY AND BIOCHEMISTRY OF ANTITUBULINS
抗微管蛋白的分子药理学和生物化学
  • 批准号:
    6103484
  • 财政年份:
    1999
  • 资助金额:
    $ 3.78万
  • 项目类别:
400 MHZ NMR WITH MICROPROBE
带微型探针的 400 MHz NMR
  • 批准号:
    2803013
  • 财政年份:
    1999
  • 资助金额:
    $ 3.78万
  • 项目类别:
MACROMOLECULAR ADDUCTS OF ELECTROPHILIC XENOBIOTICS
亲电异生物质的大分子加合物
  • 批准号:
    6221048
  • 财政年份:
    1999
  • 资助金额:
    $ 3.78万
  • 项目类别:
MOLECULAR PHARMACOLOGY AND BIOCHEMISTRY OF ANTITUBULINS
抗微管蛋白的分子药理学和生物化学
  • 批准号:
    6269909
  • 财政年份:
    1998
  • 资助金额:
    $ 3.78万
  • 项目类别:
OXIDATIVE BIOMARKERS IN ASTHMA
哮喘中的氧化生物标志物
  • 批准号:
    2596116
  • 财政年份:
    1998
  • 资助金额:
    $ 3.78万
  • 项目类别:
MACROMOLECULAR ADDUCTS OF ELECTROPHILIC XENOBIOTICS
亲电异生物质的大分子加合物
  • 批准号:
    6253431
  • 财政年份:
    1997
  • 资助金额:
    $ 3.78万
  • 项目类别:

相似国自然基金

CD39通过水解胞外ATP促进衰老致学习记忆障碍的机制研究
  • 批准号:
    82304470
  • 批准年份:
    2023
  • 资助金额:
    30 万元
  • 项目类别:
    青年科学基金项目
ATP水解酶介导ROS稳态调控拟南芥根尖干细胞维持的分子机制
  • 批准号:
    32300292
  • 批准年份:
    2023
  • 资助金额:
    30 万元
  • 项目类别:
    青年科学基金项目
SecY通道转运的机理研究
  • 批准号:
    31870835
  • 批准年份:
    2018
  • 资助金额:
    59.0 万元
  • 项目类别:
    面上项目
肠道病毒解旋酶在囊泡膜上组装六聚体及催化双链RNA解旋结构基础
  • 批准号:
    81772207
  • 批准年份:
    2017
  • 资助金额:
    56.0 万元
  • 项目类别:
    面上项目
ATP水解机理对肌动蛋白组装成纤维过程的影响
  • 批准号:
    21274038
  • 批准年份:
    2012
  • 资助金额:
    82.0 万元
  • 项目类别:
    面上项目

相似海外基金

Improving Mitochondrial Function to Protect against Myocardial Ischemia/Reperfusion
改善线粒体功能以防止心肌缺血/再灌注
  • 批准号:
    9908162
  • 财政年份:
    2019
  • 资助金额:
    $ 3.78万
  • 项目类别:
Restore energy capacity in the aging heart
恢复衰老心脏的能量容量
  • 批准号:
    9297564
  • 财政年份:
    2017
  • 资助金额:
    $ 3.78万
  • 项目类别:
Improving mitochondrial function to protect against myocardial ischemia/reperfusion
改善线粒体功能以防止心肌缺血/再灌注
  • 批准号:
    9218501
  • 财政年份:
    2017
  • 资助金额:
    $ 3.78万
  • 项目类别:
The DNA Packaging Motor of Bacteriophage phi29
噬菌体phi29的DNA包装马达
  • 批准号:
    10317524
  • 财政年份:
    2017
  • 资助金额:
    $ 3.78万
  • 项目类别:
Mechanism of bacteriophage DNA packaging initiation and DNA translocation.
噬菌体DNA包装起始和DNA易位的机制。
  • 批准号:
    9274832
  • 财政年份:
    2016
  • 资助金额:
    $ 3.78万
  • 项目类别:
{{ showInfoDetail.title }}

作者:{{ showInfoDetail.author }}

知道了