がん細胞の不均一性からみた、双方向的ＥＭＴ制御系による悪性化基盤形成機構の解明

从癌细胞异质性角度阐明双向EMT控制系统恶变机制

• 批准号: 13J10159
• 负责人: 加藤 真一郎
• 金额: $ 1.32万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J10159/
• 关键词: 上皮間葉転換; 細胞間相互作用; 転移; WNT; CTGF; がん細胞の不均一性; 浸潤

上皮間葉転換（Epithelial-to-Mesenchymal Transition: EMT）は腫瘍組織内部において不均一に誘導されている。本研究課題では『EMTを起こしたがん細胞』と『EMTを起こしていないがん細胞』の間のクロストークによってEMTが双方向的に制御されることを明らかにするために、平成２５年度にEMTを正に制御する因子としてWNT3、WNT5Bが分泌されることを見出し、『EMTを起こしていないがん細胞』に対してWNT依存的EMTを誘導すること、転移能が亢進されることを明らかにした。平成２６年度は本研究課題にある「双方向性」を示すために、EMTを負に制御する液性因子の同定を目指した。TGF-betaによってEMTを誘導したヒト肺癌細胞株A549（M-A549）を用いて、培養上清を作製したところ、この培養上清はM-A549自身にEMTとは逆の現象であるMETを誘導する液性因子が含まれることを見出した。さらに、その液性因子を同定するために、intactのA549に比べてM-A549で発現および分泌亢進している遺伝子群をバイオインフォマティクスの手法（GSEA）によって探索したところ、Connective Tissue Growth Factor（CTGF）が見出された。さらに、CTGFに対するsiRNAもしくは中和抗体によって培養上清が持つMET誘導能がキャンセルされ、リコンビナントCTGFの単独処理によってMETが誘導されたことから、CTGFがEMTを負に制御するMET誘導因子となりうることが示された。さらにそのメカニズムとしてCTGFがp38MAPKを抑制することで、METを誘導することを明らかにした。以上のことから、『EMTを起こしたがん細胞』が産生する液性因子によって、周辺のがん細胞のEMTが動的に制御されうることが初めて明らかになった。

上皮间质转化（EMT）在肿瘤组织内异质性诱导。在本研究项目中，为了明确EMT是由“引起EMT的癌细胞”和“未引起EMT的癌细胞”之间的串扰双向控制的，我们发现WNT3和WNT5B作为因子被分泌正向控制 EMT，并且它们在“不经历 EMT 的癌细胞”中诱导 WNT 依赖性 EMT，并增强其转移潜力。 2014年，我们的目标是找出对EMT产生负调控的体液因子，以证明该研究课题的“双向性”。当使用其中由TGF-β诱导EMT的人肺癌细胞系A549(M-A549)制备培养上清液时，该培养上清液导致M-A549本身诱导MET，这是与EMT相反的现象。发现其中包括诱发体液因素。此外，为了鉴定体液因子，我们使用生物信息学方法（GSEA）寻找与完整A549相比在M-A549中表达和分泌增加的基因，并发现结缔组织生长因子（CTGF）。此外，培养上清液的MET诱导能力被siRNA或针对CTGF的中和抗体消除，并且通过单独用重组CTGF处理来诱导MET，这表明CTGF可以是负调节EMT的MET诱导因子。此外，我们发现 CTGF 通过抑制 p38 MAPK 诱导 MET。综上所述，首次揭示了“发生EMT的癌细胞”产生的体液因子可以动态控制周围癌细胞的EMT。

项目成果

Critical contribution of MCL-1 in EMT-associated chemo-resistance in A549 non-small cell lung cancer

MCL-1 在 A549 非小细胞肺癌 EMT 相关化疗耐药中的关键作用

• DOI: 10.3892/ijo.2015.2861
• 发表时间: 2015
• 作者: Toge M; Yokoyama S; Kato S; Sakurai H; Senda K; Doki Y; Hayakawa Y; Yoshimura N; Saiki I
• 通讯作者: Saiki I

Procyanidin C1 from Cinnamomi Cortex inhibits TGF-β-induced epitheli al-to-mesenchymal transition in the A549 lung cancer cell line

肉桂皮中的原花青素 C1 抑制 A549 肺癌细胞系中 TGF-β 诱导的上皮间质转化

• DOI: 10.3892/ijo.2013.2139
• 发表时间: 2013
• 影响因子: 5.2
• 作者: Kin R; Kato S; Kaneto N; Sakurai H; Hayakawa Y; Li F; Tanaka K; Saiki I; Yokoyama S
• 通讯作者: Yokoyama S

Mesenchymal-transitioned cancer cells instigate surrounding c ancer cells to metastasis via secretion of WNT lieands

间充质转化癌细胞通过分泌 WNT 类物质促使周围癌细胞转移

• 发表时间: 2013
• 作者: 加藤 真一郎;横山 悟;早川 芳弘;済木 育夫
• 通讯作者: 済木 育夫