イオンチャネル型シグマI受容体の内在性リガンドの探索

寻找离子型 Sigma I 受体的内源配体

基本信息

批准号：
09878180
负责人：
植田弘師
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09878180/
关键词：
シグマI受容体 G蛋白質 GTPase GTP_γS 百日咳毒素バキュロウイルス

项目摘要

シグマI受容体の内在性リガンドの探索に先立って、マウス脳各部位のシナプス膜標品を用いて高親和性GTPase活性あるいは〔^<35>S〕GTP_γS結合活性を測定したところ、GTPase活性は、シグマ受容体アゴニストの(+)-pentazocine、(+)-3-PPP、SA4503などによって有意な刺激作用がみられ、アンタゴニストのNE-l00はそれらの刺激効果を有意に抑制した。また、〔^<35>S〕GTP_γS結合活性もGTPase活性の場合と同様にアゴニストによる活性上昇作用が認められた。さらに、小脳シナプス膜での(+)-pentazocineによる〔^<35>S〕GTP_γS結合活性上昇作用は百日咳毒素処置により遮断され、リコンビナントのGi蛋白質を再構成することで活性の回復が認められた。以上のことから、G蛋白質連関型のシグマ受容体が存在することを明らかとした。しかしながら、脳各部位における〔^3H〕(+)-pentazocineの受容体結合活性と〔^<35>S〕GTP_γS結合活性との間に相関性はみられず、G蛋白質と連関しないシグマ受容体の存在も示唆された。近年、シグマI受容体がクローニングされ、マウス小脳からRT-PCR法によって得られた受容体クローンをバキュロウイルス/Sf21細胞発現系に組み込み、その受容体と各種リコンビナントG蛋白質を特異的に共発現させた細胞膜標品で〔^<35>S〕GTP_γS結合活性をみたところ、いずれの膜標品においても活性上昇はみられなかった。したがって、シグマI受容体はG蛋白質と連関しない受容体であることが確認された。

在寻找σ I受体的内源性配体之前，我们使用来自小鼠大脑不同部位的突触膜制剂测量了高亲和力GTP酶活性或[^ 35 S]GTP_γS结合活性，并发现GTP酶活性、sigma受体激动剂(+)-喷他佐辛、(+)-3-PPP、SA4503等有明显的刺激作用，而拮抗剂NE-100则显着抑制这些刺激作用。此外，与GTP酶活性的情况类似，观察到激动剂诱导的[^ 35 S]GTP_γS结合活性的增加。此外，(+)-喷他佐辛对小脑突触膜上[^ 35 S]GTP_γS结合活性的增加作用被百日咳毒素处理阻断，并且通过用重组Gi蛋白重建来恢复活性。由上可知，存在G蛋白连接的σ受体。然而，各脑区域的[^ 3H](+)-喷他佐辛受体结合活性和[^ 35 S]GTP_γS结合活性之间不存在相关性，并且与不与G蛋白连接的σ受体存在相关性。最近，sigma I受体已被克隆，并且通过RT-PCR从小鼠小脑获得的受体克隆被整合到杆状病毒/Sf21细胞表达系统中，以特异性地共表达该受体和各种重组G蛋白。细胞膜制剂中的35S]GTP_γS结合活性，在任何膜制剂中均未观察到活性增加。因此，证实了σI受体是不与G蛋白连接的受体。