高度にADMA化されたRPS２の代謝回転システムの解析と病態生理的役割の解明

高度 ADMA 化的 RPS2 周转系统分析及其病理生理作用的阐明

基本信息

批准号：
26460683
负责人：
木本真順美
金额：
$ 3.24万
依托单位：
Okayama Prefectural University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、タンパク質の翻訳後修飾の一つであるタンパク質アルギニンメチル化の病態生理的役割を解明するため、高度にアルギニンメチル（ADMA）化された40S ribosomal protein subunit 2 (RPS2) に焦点を当て、そのタンパク質代謝回転を解析することである。計画に従い実施した研究結果を以下に示した。（１）ADMA化されたRPS2が体内ADMA濃度の主な制御系としての可能性。ラット組織中の遊離型ADMAならびにタンパク結合型ADMAを当研究室で開発した競合阻害ELISA法により測定した。結合型ADMAの組織間における存在量とRPS2ならびにADMA化されたRPS2の発現量はよく合致していた。一方、組織中の遊離型ADMA濃度／結合型ADMA濃度(%)は、ADMAの分解酵素であるDDAH活性レベルと正の相関を示した。以上の結果は、RPS2のADMA化が組織中の結合型ADMA濃度を規定する主要因となることを示唆するとともに、体内の遊離型ADMAの濃度制御にはDDAHが重要な鍵を握っていることを示している。（２）ヒトPRMT3（RPS2を特異的にADMA化する酵素）に対するモノクローナル抗体の作製とエピトープ解析。得られた２種のモノクローナル抗体、C2B6 (IgG2a)およびG1H12 (IgG1)のうち、C2B6はELISAや免疫沈降に適し、そのエピトープはPRMT3のzinc finger ドメイン(50-99 a.a.)と重なる領域にあり、今後の研究遂行に良好なプローブとして働くことが期待される。（３）PRMT1、PRMT3を単独に、あるいはダブルノックダウンさせたHepG2におけるRPS2のADMA化率の変動が認められなかったことから、RPS2のADMA化には他のPRMTsの代償作用のあることが示唆された。

本研究的目的是通过重点关注高度精氨酸甲基化 (ADMA) 的 40S 核糖体蛋白亚基 2 (RPS2)，阐明蛋白质精氨酸甲基化（蛋白质翻译后修饰之一）的病理生理作用。目的是分析蛋白质周转率。根据计划进行的研究结果如下所示。 (1)ADMA修饰的RPS2作为体内ADMA浓度的主要控制系统的可能性。使用我们实验室开发的竞争性抑制 ELISA 方法测量大鼠组织中的游离 ADMA 和蛋白结合 ADMA。不同组织中结合的ADMA的丰度与RPS2和ADMA修饰的RPS2的表达水平非常一致。另一方面，组织中的游离ADMA浓度/结合ADMA浓度(％)与降解ADMA的酶DDAH的活性水平呈正相关。上述结果表明，RPS2的ADMA转化是调节组织中结合ADMA浓度的主要因素，并且DDAH掌握着控制体内游离ADMA浓度的重要关键。 (2)针对人PRMT3（一种将RPS2特异性转化为ADMA的酶）的单克隆抗体的制备和表位分析。在获得的两种单克隆抗体 C2B6 (IgG2a) 和 G1H12 (IgG1) 中，C2B6 适用于 ELISA 和免疫沉淀，其表位位于与 PRMT3 的锌指结构域 (50-99 a.a.) 重叠的区域。预计它将成为未来研究的良好探针。 (3)在PRMT1和PRMT3的单次或双次敲低的HepG2细胞中没有观察到RPS2 ADMA化率的变化，这表明RPS2的ADMA化对其他PRMT具有补偿作用。

项目成果

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Activation of AMP-activated protein kinase and stimulation of energy metabolism by the treatment of acetic acid in L6 myotube cells

乙酸处理 L6 肌管细胞中 AMP 激活蛋白激酶的激活和能量代谢的刺激

DOI：
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
0
作者：
Hitomi Maruta; Yukihiro Yoshimura; Aya Araki; Masumi Kimoto; Yoshitaka Takahashi; Hiromi Yamashita
通讯作者：
Hiromi Yamashita

Metabolism of exogenous acetic acid induces glut4 expression through activation of AMP-activated protein kinase in rat L6 myotube cells

外源乙酸代谢通过激活大鼠 L6 肌管细胞中 AMP 激活蛋白激酶诱导 glut4 表达

DOI：
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
0
作者：
Yoshimura Y; Maruta H; Araki A; Kimoto M; Takahashi Y; Yamashita H
通讯作者：
Yamashita H

Inhibitory effect of nutmeg extracts on 5-lipoxygenase activity

肉豆蔻提取物对5-脂氧合酶活性的抑制作用

DOI：
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
0
作者：
Kawakami Y; Mori Y; Okamoto K; Okochi S; Suzuki
通讯作者：
Suzuki

Dioscorea japonica extract suppresses cyclooxygenase-2 and microsomal prostaglandin E synthase-1 in lung carcinoma A549 cells and macrophage-like RAW264 cells.

山药提取物抑制肺癌 A549 细胞和巨噬细胞样 RAW264 细胞中的环氧合酶 2 和微粒体前列腺素 E 合酶 1。

DOI：
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
0
作者：
Keisuke Toda; Izumi Tsukayama; Takuto Mega; Mitsuki Tanaka; Yasunori Takeda; Tishiya Arakawa; Yuki Kawakami; Masumi Kimoto; Yoshitaka Takahashi; Toshiko Suzuki
通讯作者：
Toshiko Suzuki

酢酸はラット培養筋管細胞においてAMPK活性化を介してglut4の発現を亢進する

乙酸通过 AMPK 激活增强培养的大鼠肌管细胞中 glut4 的表达