炎症性筋疾患の筋膜におけるCXCL13発現細胞の局在と細胞種の同定

炎症性肌病筋膜中 CXCL13 表达细胞的定位和细胞类型鉴定

基本信息

批准号：
22K08530
负责人：
吉田健
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

16症例［皮膚筋炎10例（抗合成酵素症候群を含む）と多発性筋炎6例（抗合成酵素症候群を含まず）］の筋膜を含んだ筋生検組織を用いてトランスクリプトーム解析行ったが、不適切症例を除き再度、15症例［皮膚筋炎9例（抗合成酵素症候群を含む）と多発性筋炎6例（抗合成酵素症候群を含まず）］でトランスクリプトーム解析を行った。その結果、多発性筋炎の筋膜と比較して皮膚筋炎の筋膜ではCXCL13の発現量は10倍以上と高発現していたが、補正したp-value (FDR p-value)では0.05未満に至らなかった。しかし、同じCXCLケモカインの中でCXCL10が15倍以上と高発現しており、FDR p-valueも0.05未満であったため、まずはCXCL10を解析対象とした。筋膜でCXCL10を高発現している局在と細胞種を同定するためにin situ hybridization (ISH)を行った。その結果、CXCL10は炎症細胞が浸潤している周囲に多く存在する傾向がみられた。また、炎症細胞が浸潤していない部位でも観察される部位がみられた。CXCL10陽性細胞の中で細胞の形態上、紡錘形であるものが存在したため、線維芽細胞をはじめとする間葉系細胞マーカーの1つであるビメンチンとCXCL10の二重染色を行った。その結果、多発性筋炎の筋膜と比較して皮膚筋炎の筋膜ではダブルポジティブの細胞数が有意に多かった。現在、ImageJを用いて、CXCL10やビメンチンの発現量も解析している。

使用16例[10例皮肌炎（包括抗合成酶综合征）和6例多发性肌炎（不包括抗合成酶综合征）]的含有筋膜的肌肉活检组织进行转录组分析，但排除不适当的病例，我们再次进行了转录组分析。 15例[皮肌炎9例(含抗合成酶综合征)，多发性肌炎6例(不含抗合成酶综合征)]。结果，皮肌炎筋膜中CXCL13的表达水平比多发性肌炎筋膜高10倍以上，但校正p值（FDR p值）小于0.05。。然而，在相同的CXCL趋化因子中，CXCL10的表达量高出15倍以上，并且FDR p值小于0.05，因此我们首先针对CXCL10进行分析。进行原位杂交 (ISH) 来鉴定筋膜中高表达 CXCL10 的位置和细胞类型。结果表明，CXCL10往往大量存在于炎症细胞浸润的区域周围。此外，在某些区域，即使在未浸润的区域也观察到了炎症细胞。由于一些CXCL10阳性细胞在形态上呈纺锤形，因此我们对CXCL10和波形蛋白进行了双重染色，波形蛋白是包括成纤维细胞在内的间充质细胞的标记物之一。结果，皮肌炎筋膜中的双阳性细胞数量明显高于多发性肌炎筋膜中的双阳性细胞数量。我们目前正在使用 ImageJ 分析 CXCL10 和波形蛋白的表达水平。