Establishment of new intervention methods for hematopoietic transcriptional control for clinical application.

建立临床应用的造血转录控制新干预方法。

• 批准号: 22K08483
• 负责人: 奥田 司
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08483/
• 关键词: 転写因子; 白血病; リン酸化; Yeast Two-Hybrid; 染色体転座; キナーゼ; 翻訳後修飾; RUNX1; 造血発生

本年度はRUNX1分子のセリン・スレオニン残基のリン酸化について進展があった。公開データベース探索によってラントドメイン内でリン酸化を受けているアミノ酸残基群を複数特定し、これらのアミノ酸残基群を非リン酸化セリンを模倣するアラニンへ置換させた変異体分子や、リン酸化型セリンを模倣するアスパラギン酸へと置換した変異分子を作製し検討した。すると、いずれの変異によっても、RUNX1は転写活性化能を大きく失うことが判明した。RUNX1活性制御の新たな作用点である可能性を検討すべく、現在、詳細の検討を進めている。一方、胎生中期のマウス胎仔由来cDNAライブラリーを用いたYeast Two-HybridスクリーニングによってRUNX1のC末端ドメインと会合するタンパクを特定した。そのうち一つはこれまでRUNX1との関係性が知られていない、あるキナーゼタンパク（ここでは便宜上キナーゼXと記載する）であった。定法に従って構成的活性化変異キナーゼXを作製したところ、野生型RUNX1と共発現させるとRUNX1による標的遺伝子群の転写結成化能を顕著に上昇させることを見出した。現在そのリン酸化の標的となるアミノ酸残基の特定に注力している。上記に加え、補完的アプローチとして、RUNX1の転写標的遺伝子群の探索も行っている。本年度は候補遺伝子法によって2つの免疫関連遺伝子と1つの細胞周期関連遺伝子、そして１つの神経系キナーゼ遺伝子を特定した。また、公開データベースを利用した手法によって造血器腫瘍関連遺伝子を別個に一つ特定した。現在、その詳細をウエットラボベースの解析によって検討している。当該研究では、こうした複数のアプローチによってRUNX1作用への干渉手法の確立へと進めて行きたい。

今年，RUNX1分子中丝氨酸和苏氨酸残基的磷酸化取得了进展。通过搜索公共数据库，我们鉴定了在runt结构域内磷酸化的多组氨基酸残基，并创建了突变分子，其中这些氨基酸残基被丙氨酸取代，其模仿非磷酸化丝氨酸，并且我们创建了磷酸化丝氨酸。研究了一种突变分子，其中天冬氨酸被取代为模拟丝氨酸。他们发现，无论哪种突变，RUNX1 都会显着丧失激活转录的能力。我们目前正在进行详细研究，以调查这是否是控制 RUNX1 活性的新作用点的可能性。另一方面，我们使用源自中期胚胎小鼠胎儿的 cDNA 文库，通过酵母双杂交筛选，鉴定了与 RUNX1 C 末端结构域相关的蛋白质。其中之一是某种激酶蛋白（为方便起见，此处称为激酶 X），其与 RUNX1 的关系迄今为止尚不清楚。我们创建了一种组成型激活的突变激酶目前，我们的重点是鉴定作为磷酸化目标的氨基酸残基。除此之外，我们还在探索RUNX1的转录靶基因作为补充方法。今年，我们利用候选基因方法鉴定了2个免疫相关基因、1个细胞周期相关基因和1个神经系统激酶基因。此外，我们利用公共数据库单独鉴定了一种造血肿瘤相关基因。我们目前正在通过基于湿实验室的分析来调查细节。在这项研究中，我们希望使用这些多种方法来建立一种干扰 RUNX1 作用的方法。

项目成果

クロマチンリモデリング機構アップデートと創薬

染色质重塑机制更新与药物发现

• 发表时间: 2023
• 作者: 桒原康通;奥田 司
• 通讯作者: 奥田 司

RUNX1 requires SNF5 for its functional cooperation with the chromatin remodeling complex, SWI/SNF.

RUNX1 需要 SNF5 才能与染色质重塑复合体 SWI/SNF 进行功能配合。

• 发表时间: 2022
• 作者: Yasumichi Kuwahara; Tatsushi Yoshida; Kenta Yamasaki; Kenjiro Tadagaki; Tsukasa Okuda
• 通讯作者: Tsukasa Okuda

Transcriptional regulation of G1-cyclin gene CCND1 by RUNX1 and its leukemia-related form RUNX1-ETO.

RUNX1 及其白血病相关形式 RUNX1-ETO 对 G1 细胞周期蛋白基因 CCND1 的转录调节。

• 发表时间: 2022
• 作者: Yoshihito Shimizu; Yasumichi Kuwahara; Kenta Yamasaki; Kenjiro Tadagaki; Tatsushi Yoshida; Tsukasa Okuda.
• 通讯作者: Tsukasa Okuda.

Dual targeting of EZH1 and EZH2 for the treatment of malignant rhabdoid tumors

EZH1和EZH2双重靶向治疗恶性横纹肌样瘤

• DOI: 10.1016/j.omto.2022.09.006
• 发表时间: 2022-12-15
• 作者: Shinohara, Haruka;Sawado, Rie;Nakagawa, Makoto;Hattori, Ayuna;Yamagata, Kazutsune;Tauchi, Kimiharu;Ito, Jumpei;Kuwahara, Yasumichi;Okuda, Tsukasa;Ogawa, Chitose;Kitabayashi, Issay
• 通讯作者: Kitabayashi, Issay

TRAIL創薬

TRAIL药物发现

• 发表时间: 2022
• 作者: 吉田達士;酒井敏行;奥田 司
• 通讯作者: 奥田 司