非古典的Caspase-4活性を標的とした肺線維化制御法の探索

寻找针对非经典 caspase-4 活性来控制肺纤维化的方法

基本信息

批准号：
22K08296
负责人：
大林邦衣
金额：
$ 2.75万
依托单位：
University of Occupational and Environmental Health, Japan
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

異常なタンパク合成による強い小胞体ストレスは、肺胞上皮細胞で炎症性細胞死を導き、慢性炎症とともに肺線維化を引き起こす。炎症性細胞死にはCaspase-4が関わり、線維化を増悪する上皮間葉転換を起こすが、上皮間葉転換はCaspaseの古典的なプロテアーゼ活性には依存しないことから、Caspase-4には未知の機能があると考えた。本研究の目的は、非常に強い小胞体ストレスを誘導し、肺線維化を引き起こす新型コロナウイルス感染症を念頭に、小胞体ストレス誘導性Caspase-4の役割解明と、Caspase-4阻害化合物による肺線維化の制御法を確立することである。今年度は①Caspase-4発現を誘導できる細胞株の作製とその活性評価系を確立した。②データベースを用いて、Caspase-4遺伝子発現とともに変動する遺伝子を解析した。③Caspase-4阻害化合物スクリーニングに用いる細胞株を作製した。その成果は以下である。①TAKARA-bio tet-oneシステムを用いてドキシサイクリン依存的にCaspase-4発現を誘導可能な細胞株を作製し、ドキシサイクリン濃度依存的なCaspase-4発現を確認した。さらに上皮間葉転換の誘導を確認したが、細胞死は確認されなかった。②Caspase-4遺伝子と相関を持って変動する遺伝子の中に複数の転写因子が存在することを確認し、Caspase-4の役割を解明する手がかりを得た。③Caspase-4レポーター細胞を作製し、そのレポーター活性を評価し、阻害化合物のスクリーニングに有用であることを確認した。

蛋白质合成异常引起的强烈内质网应激导致肺泡上皮细胞炎症细胞死亡，导致慢性炎症和肺纤维化。 Caspase-4 参与炎症细胞死亡并引起上皮间质转化，从而加剧纤维化。然而，由于上皮间质转化不依赖于 caspase 的经典蛋白酶活性，因此 caspase-4 的作用尚不清楚。我以为它有一个功能。本研究的目的是阐明内质网应激诱导的 caspase-4 的作用，并通过诱导 caspase-4 抑制剂来研究 caspase-4 在肺部的作用，同时考虑到新型冠状病毒感染会诱发极强的 caspase-4 抑制剂。内质网应激并导致肺纤维化，目标是建立控制纤维化的方法。今年，我们 (1) 创建了一种可以诱导 Caspase-4 表达的细胞系，并建立了评估其活性的系统。 ②利用该数据库，我们分析了随Caspase-4基因表达而变化的基因。 ③建立用于筛选caspase-4抑制化合物的细胞系。结果如下。 ① 使用TAKARA-bio tet-one系统，我们创建了能够以多西环素依赖性方式诱导Caspase-4表达的细胞系，并证实了多西环素浓度依赖性Caspase-4表达。此外，确认了上皮-间质转化的诱导，但未确认细胞死亡。 ②我们证实了与caspase-4基因相关波动的基因中存在多个转录因子，获得了阐明caspase-4作用的线索。 ③我们生成了Caspase-4报告细胞，评估了其报告活性，并证实它们可用于筛选抑制性化合物。

项目成果

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ANGPTL8 links inflammation and poor differentiation, which are characteristics of malignant renal cell carcinoma

ANGPTL8与炎症和分化不良有关，这是恶性肾细胞癌的特征

DOI：
10.1111/cas.15700
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
5.7
作者：
Takuo Matsukawa ; Tomomitsu Doi ; Kunie Obayashi ; Kazuhiro Sumida ; Naohiro Fujimoto ; Motoyoshi Endo
通讯作者：
Motoyoshi Endo

非小細胞肺癌の進展における炎症性カスパーゼの機能解明

阐明炎性半胱天冬酶在非小细胞肺癌进展中的功能