Molecular and cellular mechanisms about the acquired radioresistance in cancer

癌症获得性放射抗性的分子和细胞机制

• 批准号: 22K07749
• 负责人: 浦田 芳重
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07749/
• 关键词: 放射線治療抵抗性; エクソソーム; 癌関連線維芽細胞

マウス大腿部皮下にルイス肺癌細胞を注入し、成長してきた腫瘍組織から癌関連線維芽細胞（CAF）を単離・培養増幅し、以下の実験を行った。CAFはそれぞれ0、1、5 GyのX線で照射した48時間後に、培養上清を収集し、エクソソームを精製・採取した。精製・採取したエクソソームはウエスタンブロット法によるCD63の発現で、その純度を確認できた。また、精製・採集したCAF由来エクソソームをヒトHCT8大腸癌細胞およびヒトMCF7乳癌細胞に添加培養を行い、培養後3日目に癌細胞を2 GyのX線に曝し、細胞生存、DNA損傷、およびコロニー形成能により放射線感受性を定量評価した。これまでの実験結果から、培養上清から採取できたCAF由来エクソソームは、その量と純度に大差がなかった。また、対象群（0 Gy）と比べ、1 Gyと5 GyのX線で照射したCAF由来エクソソームの添加培養は、HCT8大腸癌細胞およびMCF7乳癌細胞の形態に明らかな変化が観察できず、細胞の生存率にも有意な影響を及ぼさなかった。しかし、2 Gy追加照射後のHCT8大腸癌細胞およびMCF7乳癌細胞は、1 Gyで照射したCAF由来エクソソームの添加培養では5 Gyで照射したCAF由来エクソソームの添加培養より、コロニー形成数が有意に高値であり、DNA傷害の程度（gamaH2Ax染色）も明らかに少なかった。これらの結果から、1 Gyで照射したCAF由来エクソソームは、癌細胞の放射線耐性を誘導することが示唆された。

将Lewis肺癌细胞皮下注射到小鼠大腿内，从生长的肿瘤组织中分离培养癌症相关成纤维细胞（CAF），并进行以下实验。用0、1、5Gy的X射线照射CAF 48小时后，收集培养上清，纯化并收集外泌体。使用蛋白质印迹法通过 CD63 的表达来确认纯化和收集的外泌体的纯度。另外，将纯化收集的CAF来源的外泌体添加到人HCT8结肠癌细胞和人MCF7乳腺癌细胞中培养，培养后第3天将癌细胞暴露于2Gy的X射线下，测定细胞数。通过集落形成能力定量评估存活率、DNA损伤和放射敏感性。从迄今为止的实验结果来看，从培养物上清液中收集的CAF来源的外泌体的数量和纯度没有显着差异。此外，与对照组（0 Gy）相比，CAF来源的外泌体经1 Gy和5 Gy X射线照射时，HCT8结肠癌细胞和MCF7乳腺癌细胞的形态未见明显变化。观察到，它对存活率也没有显着影响。然而，对于额外照射2 Gy后的HCT8结肠癌细胞和MCF7乳腺癌细胞，与用1 Gy照射的CAF来源的外泌体培养时形成的集落数明显高于用5 Gy照射的CAF来源的外泌体培养时形成的集落数。 DNA 损伤程度（gamaH2Ax 染色）也明显较低。这些结果表明，经 1 Gy 照射的 CAF 衍生的外泌体可诱导癌细胞产生放射抗性。

项目成果

The potential effect of nicaraven in the acquired radioresistance of cancer cells

尼卡拉文对癌细胞获得性放射抗性的潜在影响

• 发表时间: 2022
• 作者: Kai Huang; Tao
• 通讯作者: Tao