Lipid Reprogramming Mechanism of Hepatitis Virus

肝炎病毒脂质重编程机制

• 批准号: 22K07111
• 负责人: 塩田 智之
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Foundation for Biomedical Research and Innovation at Kobe
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07111/
• 关键词: A型肝炎ウイルス(HAV); 極長鎖脂肪酸; RNAseq解析; 脂肪酸合成酵素; 脂肪酸伸長酵素; A型肝炎ウイルス; レプリケーションコンパートメント; リピドミクス解析

本研究の目的はA型肝炎ウイルス(HAV)のCRISPRゲノムワイドスクリーニングによって同定された脂質代謝に重要な役割を果たす、ACACA、HSD17B12のHAV生活環における役割を明らかにすることにより、HAVが脂質代謝を変化させ、極長鎖脂肪酸をどのように効率的な複製機構に利用しているかを明らかにすることである。各因子ノックアウト細胞による予備的な検討により、ACACAによりコードされるACC１、HSD17B12によりコードされる17β-HSD12がHAVの複製に重要であることが示唆されている。初年度に予定していた下記３項目について下記の様な結果を得ている。①KO表現系のAdd-back系の構築についてはセロチン酸(26:0)によるウイルス増殖の回復を確認した。②宿主側責任候補遺伝子の同定については、RNAseq解析により得られている感染後発現の増加する因子の内、脂肪酸伸長酵素ELOVL４はノックダウンによってウイルス増殖を抑制することが分かっていたが、感染後７日、14日においてタンパク質レベルで発現が増加していることを確認することができた。③SREBP成熟を介した極長鎖脂肪酸合成経路について検討を行なったが、感染後７日、14日においてタンパク質レベルでSREBPの成熟を観察することができなかった為、その他の経路を介したmTOR非依存的経路の存在が示唆される。これらの結果から、極長鎖脂肪酸がHAVの増殖に重要であり、感染によるELOVL4の増加が極長鎖脂肪酸合成を促進するが、その合成経路はmTORに依存しないことが明らかとなった。

本研究的目的是阐明ACACA和HSD17B12在HAV生命周期中的作用，它们是通过甲型肝炎病毒（HAV）的CRISPR全基因组筛选而鉴定的，并且在脂质代谢中发挥重要作用。阐明如何利用极长链脂肪酸实现有效的复制机制。使用敲除细胞对每个因子进行的初步研究表明，ACACA 编码的 ACC1 和 HSD17B12 编码的 17β-HSD12 对于 HAV 复制很重要。关于第一年计划的以下三个项目，我们获得了以下结果。 ①关于KO表达系统的add-back系统的构建，我们确认了蜡酸（26:0）恢复了病毒增殖。 ② 关于宿主侧相关候选基因的鉴定，通过RNAseq分析获得的感染后表达增加的因子中，已知脂肪酸延长酶ELOVL4的敲低抑制了病毒增殖；在蛋白质水平上确认了表达增加；第7天和第14天。 ③虽然我们研究了通过SREBP成熟的超长链脂肪酸合成途径，但我们无法在感染后第7天和第14天在蛋白质水平上观察到SREBP成熟，这表明存在依赖性途径。这些结果表明，极长链脂肪酸对于HAV增殖很重要，并且感染引起的ELOVL4的增加促进了极长链脂肪酸的合成，但合成途径不依赖于mTOR。