免疫寛容プラットフォームとしてのラット胸腺髄質の上皮細胞欠損領域の解析

大鼠胸腺髓质上皮细胞缺陷区作为免疫耐受平台的分析

基本信息

批准号：
22K06797
负责人：
沢登祥史
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Dokkyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

以下の小項目番号は申請書の研究実施計画に基づく。「I-A: mEFAの組織学的解析」および、「II-A: mEFA細胞群のプロテオミクス解析」に記載されたmEFAに存在する細胞の単離と同定を行った。免疫組織化学解析からmEFAに局在すると予想されたCD103陰性新規DC候補細胞を単離しmRNAを抽出し、マイクロアレイ解析した。対照として、既知のcDCサブセットおよび脾臓のCD103陰性新規DC候補細胞を解析した。その結果、胸腺のCD103陰性新規DC候補細胞に特異的に発現する遺伝子として、Mmp14やApoc1などが見出された。この内Mmp14に対する抗体を購入しフローサイトメトリーを行い、胸腺のCD103陰性新規DC候補細胞に特異的に発現することを見出した。しかし、免疫染色ではMMP14発現は必ずしもmEFAに限定されず、さらなる細胞の探索が必要であることが示唆された。「II-B: 線維芽細胞のトランスクリプトーム解析」を行うために、線維芽細胞の単離を試みた。しかし、市販のPDGFRb抗体はいずれも免疫組織化学染色では良好な染色を呈するが、フローサイトメトリー上では染色できないために、単離は難しいという結論に達した。現在、CD45陰性ストローマ細胞全体をソートし、シングルセル解析することにより線維芽細胞を含む胸腺ストローマ細胞全体のトランスクリプトーム情報を得ることを目指し、実験が進行中である。「I-B: 質量顕微鏡によるmEFAの低分子マッピング」を進めるため、胸腺組織を質量顕微鏡で解析した。複数のマトリクスを用いて測定を繰り返し、髄質に存在する低分子化合物の候補としてホスファチジルセリン(36:1)およびオクソトリコシル酸などを同定した。また、以上の結果の一部を第51回2本免疫学会学術集会（2022年12月、熊本）にて報告した。

以下子项目编号基于申请表中的研究实施计划。分离并鉴定了“I-A：mEFA 的组织学分析”和“II-A：mEFA 细胞群的蛋白质组学分析”中描述的 mEFA 中存在的细胞。分离通过免疫组织化学分析预测位于mEFA中的CD103阴性新型DC候选细胞，提取mRNA，并进行微阵列分析。作为对照，分析了已知的 cDC 子集和脾 CD103 阴性新型 DC 候选细胞。结果发现，Mmp14和Apoc1是胸腺中CD103阴性新型DC候选细胞中特异性表达的基因。我们购买了针对Mmp14的抗体并进行了流式细胞术，发现它在胸腺中CD103阴性的新型DC候选细胞中特异性表达。然而，免疫染色表明MMP14表达不一定限于mEFA，还需要进一步的细胞探索。为了进行“II-B：成纤维细胞的转录组分析”，我们尝试分离成纤维细胞。然而，尽管所有市售的PDGFRb抗体在免疫组织化学染色中都表现出良好的染色效果，但它们不能通过流式细胞术染色，因此我们得出分离是困难的结论。目前正在进行实验，目的是通过对整个 CD45 阴性基质细胞进行分选并进行单细胞分析，获得整个胸腺基质细胞（包括成纤维细胞）的转录组信息。为了继续“I-B：使用质量显微镜进行 mEFA 的小分子图谱”，使用质量显微镜对胸腺组织进行了分析。通过使用多个基质重复测量，我们确定磷脂酰丝氨酸 (36:1) 和氧化三基酸是髓质中存在的低分子量化合物的候选者。此外，上述部分结果已在第51届日本免疫学会年会（2022年12月，熊本）上报告。